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主题：【求助】蛋白质分离纯化

浏览0 回复4 电梯直达
Ins_e020ef66
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发表于：2023/06/09 17:43:03 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
各位大佬有使用“DEAE Sepharose fast 离子交换柱（1.6×30.0cm）”和 “Sephacryl S-200 HR 色谱柱（2.6×70.0cm）”做过蛋白纯化实验的吗?有没有操作视频呀，只是查文献看到这么个流程：
“将透析后的样品在4°C下以100000×g离心20分钟，并将上清液应用于DEAE Sepharose快流离子交换柱（2.6×12.0 cm），该柱已用pH 7.4的50mM Tris–HCl缓冲液平衡。在用相同的缓冲溶液以0.5mL/min洗涤柱并洗脱未吸附的物质后，用缓冲溶液中从0到400mM的递增NaCl溶液从柱中以3.0mL级分洗脱蛋白质。收集钒浓度最高的级分，并在1.6×100 cm Sephacryl S-300柱（GE Healthcare，Uppsala，Sweden）中通过凝胶过滤进一步分级，用三个床体积的50mM Tris–HCl缓冲液（pH 8.0）以1.3 mL/min洗脱。”
对这个实验完全没有概念，网上也没找到操作的视频，不知道需要准备哪些东西呀，无从下手，有做过的大佬吗，帮帮孩子吧，万分感谢！
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2023/6/10 8:55:01 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
去B搜索一下层析，看看相关视频就知道了，不难
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2023/6/10 16:18:50 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 歌名(Ins_eedcdc41) 发表:
去B搜索一下层析，看看相关视频就知道了，不难
就是在B站没有搜到
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Ins_e020ef66
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2023/6/11 1:48:05 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 歌名(Ins_eedcdc41) 发表:
去B搜索一下层析，看看相关视频就知道了，不难
我想请教一下，这个是需要自己装柱子，然后再上样洗脱吗？有没有装好的柱子可以直接买来用呢？
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2023/6/12 17:14:09 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 Ins_e020ef66(Ins_e020ef66) 发表:
我想请教一下，这个是需要自己装柱子，然后再上样洗脱吗？有没有装好的柱子可以直接买来用呢？
大概率是要你自己买材料、装柱子，有AKTA的话就可以用现成柱子
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