主题：【分享】生物素蛋白标记常见问题及注意事项

浏览0 回复0 电梯直达

Ins_bf0c01c3

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

发表于：2023/08/22 14:47:50 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

生物素-亲和素系统 (biotin-avidin system，BAS)，是70年代后期应用于免疫学，并得到迅速发展的一种常用的生物反应放大系统。它具有高度特异性、敏感性、稳定性的特点，两者的亲和常数（K=1015 mol/L）比抗原-抗体（K=105～1011 mol/L）至少高1万倍，是目前已知强度最高的非共价作用，这使得生物素标记的蛋白成为研究蛋白质相互作用和筛选抗体或小分子潜力药物的强大工具。

义翘神州开发了丰富的生物素标记蛋白产品，拥有Avi-tag定点标记和化学标记两种类型的生物素标记蛋白，覆盖细胞治疗、抗体药、疫苗等热门靶点。产品具有高批间一致性、高活性等优势，适用于ELISA、Biopanning、SPR / BLI等实验。下面为大家提供生物素蛋白标记常见问题及注意事项：

生物素蛋白标记常见问题：

1、什么是生物素标记蛋白?

在生物化学中，生物素化蛋白质就是生物素与蛋白质等大分子物质共价结合的产物。生物素-亲和素亲和常数至少比抗原-抗体高一万倍,是目前发现的自然界中具有最强亲和力的物质。因此，生物素-亲和素系统已被广泛地应用于免疫诊断技术。生物素化蛋白的出现，也为类似于WB实验简化了流程，提高了效率。此外，由于生物素的小尺寸（MW = 244.31g / mol），不太影响蛋白质本身的天然功能。所以它同时具备了高亲和力、高特异性、高灵敏度的优点。

2、生物素标记蛋白有哪些应用？

生物素标记蛋白广泛的应用在生物技术的众多领域。如透析，将具有特殊结构的亲和分子制成固相吸附剂放置在层析柱中，当要被分离的蛋白混合液通过层析柱时，与吸附剂具有亲和能力的蛋白质就会被吸附而滞留在层析柱中。那些没有亲和力的蛋白质由于不被吸附，直接流出，从而与被分离的蛋白质分开，然后选用适当的洗脱液，改变结合条件将被结合的蛋白质洗脱下来。怎么释放所需蛋白呢？这需要非常严苛的条件（例如，pH=1.5的 GuHCl），这种极端条件下的蛋白是会变性的。如果需要分离标记的蛋白质，最好用亚氨基生物素标记的蛋白质。该种生物素在碱性条件下与抗生物素蛋白结合紧密，但是在降低pH以后，亲和力降低。因此亚氨基生物素标记蛋白可以通过降低pH(约pH=4)从柱子上释放。

免疫检测中的应用：在常规ELISA原理的基础上，结合生物素(B)与亲和素(A)间的高度放大作用，而建立的一种检测系统。生物素很易与蛋白质(如抗体等)以共价键结合。这样，结合了酶的亲和素分子与结合有特异性抗体的生物素分子产生反应，既起到了多级放大作用，又由于酶在遇到相应底物时的催化作用而呈色，达到检测未知抗原(或抗体)分子的目的。这可以用于通过荧光或电子显微镜定位的ELISA测定，ELISPOT测定，western印迹和其他免疫分析方法。

生物素标记注意事项：

1、依抗原或抗体分子所带可标记基团的种类（氨基、醛基或巯基）以及分子的酸碱性，选择相应的活化生物素和反应条件；

2、标记反应时，活化生物素与待标记抗原或抗体应有适当的比例；生物素：IgG 用量比(mg/mg)宜为2:1, IgG应用浓度0.5~5μg/ml; 生物素1~3个/Ag，3~5个/Ab；

3、为减少空间位阻影响，可在生物素与被标记物之间加入交联臂样结构；

4、生物素与抗原、抗体等蛋白质结合后，不影响后者的免疫活性；标记酶时则结果有不同。

更多关于生物素标记蛋白详情可以参看：https://cn.sinobiological.com/category/biotinylated-protein-elite