主题:【资料】什么是CAR-NK细胞疗法?CAR-NK细胞制备过程详解

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什么是CAR-NK细胞疗法?

自然杀伤(NK)细胞是具有高度细胞毒性的非特异性免疫效应细胞,具有消除肿瘤细胞和感染病毒细胞等异常细胞的能力。CAR-NK细胞疗法在血液瘤和实体瘤中发挥显著的效果,与CAR-T疗法相比,CAR-NK细胞疗法更安全,引起细胞因子释放综合征(CRS)和移植物抗宿主病(GVHD)的可能性更低,具有更强的抗肿瘤活性,是一个现货免疫细胞的理想选择。CAR-NK细胞的来源广泛,包括脐带血(UCB)、外周血(PB)、人诱导多能干细胞(hiPSCs)、人胚胎干细胞(hESC)、造血干细胞(HSC)和NK细胞系。



CAR-NK细胞的制备过程:

? 对不同来源的NK细胞进行分离和制备时,可以用CAR表达载体(如慢病毒)进行修饰;

? 在特定的扩增培养基中扩增NK细胞;

? 建立的CARNK细胞通常采用静脉注射,以选择性杀死肿瘤细胞。



CAR-NK细胞疗法整体解决方案

义翘神州为制药公司提供综合性的CAR-NK细胞疗法开发解决方案,包括从CAR开发、NK细胞获取和表征、NK细胞活化和扩增、NK细胞纯化、CAR-NK细胞制备到CAR-NK细胞质量控制的每一阶段。



CAR开发:



CAR可特异性识别肿瘤细胞表面抗原并与其结合,因此获得高质量CAR是开发中的关键步骤。基于15+年的经验积累和技术沉淀,义翘神州建立了四大抗体开发平台(噬菌体抗体库、杂交瘤、流式单B细胞、Beacon®B细胞)满足scFv发现的需求。同时我们还提供用于scFv筛选和CAR亲和力检测的多种CAR-NK靶点蛋白和SPR/BLI亲和力检测服务,支持CAR-NK研究。



NK细胞获取和表征:



NK细胞源于脐带血(UCB)、外周血(PB)、人诱导多能干细胞(hiPSCs)、人胚胎干细胞(hESC)、造血干细胞(HSC)和NK细胞系。由于NK细胞来源广泛,需要对NK细胞进行分离,清除T细胞、B细胞或其他污染物。



NK细胞被定义为CD3-CD16+CD56+的淋巴细胞。根据NK细胞表面标志物CD16CD56的差异性表达,可将NK细胞划分为两个亚群CD56brightCD16dim/? 和CD56dimCD16+。根据这些不同的表面标志物,利用流式抗体进行检测从而区分NK细胞亚群。义翘神州已开发高质量的CD3CD16CD25CD56KIR2DL1流式抗体,可有效分离和表征NK细胞群或亚群。



NK细胞活化和扩增:



在外周血白细胞中,只有约5%-15%NK细胞,如何获得足够的NK细胞仍是患者采用免疫治疗的主要挑战。从NK细胞活化阶段进行高效的NK细胞转导,以诱导细胞增殖。目前NK细胞培养存在多种培养方式,应用最广泛的两种方法为饲养层细胞培养和细胞因子培养。



GMP级细胞因子



相关法规明确规定,对于细胞治疗药物中原材料的选择,应尽量采用符合药典标准的原材料或批准上市的药品,优先级是:药品级>GMP级>RUO级。GMP级细胞因子对于NK细胞的发育和存活具有重要调节作用,如IL-21能诱导NK细胞的成熟,并增强其细胞毒性。GMP级细胞因子作为重要原料应用到CAR-NK药物开发过程中,可在体外扩增过程中高效激活NK细胞。义翘神州严格遵循GMP质量管理体系,成功开发出高质量、高活性的GMP级细胞因子:IL-2IL-7IL-12IL-15IL-21,助力CAR-NK细胞培养。



CAR-NK细胞制备:



慢病毒包装是CAR-NK细胞制备的关键环节。影响慢病毒包装是否成功的因素包括载体系统、转染试剂和慢病毒滴度等。义翘神州提供高品质的无血清HEK293培养基、Sinofection®转染试剂和超级核酸酶,用于慢病毒载体的高效转染。同时我们还提供细胞库检测服务和核酸酶残留检测试剂盒,满足CAR-NK细胞制备需求。



CAR-NK细胞质量控制:



为确保CAR-NK细胞治疗产品的安全性,需要进行严格的质量控制检测,包括活细胞比例检测、细胞群或亚群检测、CAR阳性率检测和杀伤效力评价等。义翘神州提供高质量的产品和服务,支持CAR-NK细胞质量控制检测。



更多详情可以参看:https://cn.sinobiological.com/category/solutions/car-nk-therapy
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