1 桂枝化学成分提取分离

桂枝10 kg，用8倍量90 %乙醇浸泡过夜，加热回流提取3次，每次2 h，合并提取液，减压浓缩至无醇味，得浓缩液约6 L。依次经等体积的石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯萃取和饱和正丁醇萃取3次。减压回收溶剂，分别得到石油醚层、二氯甲烷层、乙酸乙酯层、饱和正丁醇层和水层。

取二氯甲烷层浸膏约100 g，经硅胶柱层析（200~300目），石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱（1:0，150:1，100:1，50:1，30:1，20:1，10:1，8:1，5:1，2:1，1:1）。其中，石油醚-乙酸乙酯（150:1）洗脱的馏分Fr.Ⅰ2~4经石油醚重结晶，得到白色粉末Compound 1。石油醚-乙酸乙酯（100:1）洗脱的馏分Fr.Ⅰ7~13经石油醚重结晶，得到黄色油状液体Compound 2。石油醚-乙酸乙酯（50:1）洗脱的馏分Fr.Ⅰ24~32经硅胶柱进一步纯化，得到白色针晶Compound 3。石油醚-乙酸乙酯（20:1）洗脱的馏分Fr.Ⅰ41~59经凝胶柱层析和半制备型高效液相（55 %乙腈-甲酸水为流动相，280 nm）制备，得到白色粉末Compound 4和白色粉末Compound 5。

取乙酸乙酯层浸膏约20 g，经硅胶柱层析（200~300目），二氯甲烷-甲醇梯度洗脱（100:1，50:1，25:1，10:1，5:1，2:1，1:1）。其中二氯甲烷-甲醇（5:1）洗脱馏分Fr.Ⅱ47~57，经半制备型高效液相（50 %乙腈-甲酸水为流动相，254 nm）分离，得到黄色油状液体Compound 6。

2 化合物结构鉴定

Compound 1: 十八烷酸（Stearic acid）

白色粉末。ESI-MS: m/z 283[M-H]^-,¹H-NMR(300 MHz, CDCl₃), δ: 0.88(3H, t, CH₃), 1.28(28H, m, CH₂×14), 1.63(2H, m, -CH₂-CH₂-COOH), 2.34(2H, m, -CH₂-COOH )。上述数据与文献报道基本一致，确定该化合物为十八烷酸，其结构见图1。

Fig. 1 Chemical structure of compound 1

Compound 2: 桂皮醛（Cinnamaldehyde）

黄色油状液体。ESI-MS: m/z 131[M-H]^-, ¹H-NMR(300 MHz, CD₃OD), δ: 7.66(2H, m, H-3, H-5), 7.87(3H, m, H-2, H-4, H-6), 7.65(1H, d, J=15.9 Hz, H-7), 6.76(1H, dd, J=15.9, 7.8 Hz, H-8), 9.65(1H, d, J=7.8 Hz, H-9)。上述数据与文献报道基本一致，确定该化合物为桂皮醛，其结构见图2。

Fig. 2 Chemical structure of compound 2

Compound 3: 香豆素（Coumarin）

,172

白色针晶。¹H-NMR(300 MHz, CD₃OD), δ: 6.42(1H, dd, J=9.6, 1.5, H-3), 7.87(1H, dd, J=9.6, 2.1 Hz, H-4), 7.34(1H, d, J=6.3 Hz, H-5), 7.57(1H, td, J=7.8, Hz, H-6), 7.62(1H, d, J=7.8 Hz, H-7), 7.32(1H, d, J=6.3 Hz, H-8)。¹³C-NMR(75 MHz, CD₃OD), δ: 163.9(C-2), 118.3(C3), 146.8(C-4), 121.5(C-4’), 1130.6(C-5), 126.9(C-6), 134.2(C-7), 118.7(C-8), 156.4(C-8’)。上述数据与文献报道基本一致，确定该化合物为香豆素，其结构见图3。

Fig. 3 Chemical structure of compound 3

Compound 4: 肉桂酸（Cinnamic acid）

白色粉末。¹H-NMR(300 MHz, CD₃OD), δ: 7.39(3H, m, H-2, H-4, H-6), 7.58(2H, m, H-3, H-5), 7.60(1H, d, J=16.2 Hz, H-7), 6.40(1H, d, J=16.2 Hz, H-8)。¹³C-NMR(75 MHz, CD₃OD), δ: 135.9(C-1), 130.01(C-2, C-6), 129.2(C-3, C-5), 131.4(C-4), 146.3(C-7), 119.4(C-8), 170.3(C-9)。上述数据与文献报道基本一致，确定该化合物为肉桂酸，其结构见图4。

Fig. 4 Chemical structure of compound 4

Compound 5: 邻甲氧基肉桂酸（O-methoxy cinnamic acid）

白色粉末。¹H-NMR(300 MHz, CD₃OD), δ: 7.03(1H, d, J=8.4, H-3), 7.37(1H, td, J=7.5 Hz, H-4), 6.96(1H, td, J=7.5 Hz, H-5), 7.55(1H, dd, J=7.8, 1.5 Hz, H-6), 7.97(1H, d, J=16.2 Hz, H-7), 6.49(1H, d, J=16.2 Hz, H-8), 3.89(3H, s, OCH₃)。¹³C-NMR(75 MHz, CD₃OD), δ: 124.3(C-1), 159.8(C-2), 112.4(C3), 132.9(C-4), 119.4(C-5), 129.7(C-6), 141.6(C-7), 170.9(COOH), 56.0(OCH₃)。上述数据与文献报道基本一致，确定该化合物为邻甲氧基肉桂酸，其结构见图5。

Fig. 5 Chemical structure of compound 5

Compound 6: 邻苯二甲酸二丁酯（Dibutyl phthalate）

黄色油状液体。¹H-NMR(300 MHz, CD₃OD), δ: 7.71(4H, dd, J=9.0, 3.3Hz, H-4, H-5), 7.59(4H, dd, J=9.0, 3.3 Hz, H-3, H-6), 4.31(4H, t, J=6.6 Hz, H-8, H-8’), 1.71(4H, m, H-9, H-9’), 1.45(4H, q, J=7.2Hz, H-10, H-10’), 0.97(6H, t, J=7.5 Hz, H-11, H-11’)。¹³C-NMR(75 MHz, CD₃OD), δ: 132(C-1, C-2), 129(C-3, C-6), 133(C-4, C-5), 169(C-7, C-7’), 66(C-8, C-8’), 31(C-9, C-9’), 20(C-10, C-10’), 14(C-11, C-11’)。上述数据与文献报道基本一致，确定该化合物为邻苯二甲酸二丁酯，其结构见图6。

Fig. 6 Chemical structure of compound 6

3 小结

对桂枝的化学成分进行提取分离，采用90 %乙醇回流提取，再分别用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取。针对二氯甲烷层和乙酸乙酯层浸膏，通过硅胶柱色谱、凝胶柱色谱和半制备高效液相等分离手段，得到6个化合物，结合波谱数据，鉴定其化学结构分别为：十八烷酸、桂皮醛、香豆素、肉桂酸、邻甲氧基肉桂酸和邻苯二甲酸二丁酯。本研究结果，将为桂枝进一步的研究提供物质基础。