主题：【资料】重组蛋白纯化常用方法有哪些？义翘重组蛋白纯化服务介绍

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发表于：2023/10/19 17:15:32 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

重组蛋白纯化要利用不同蛋白间内在的相似性与差异，利用各种蛋白间的相似性来除去非蛋白物质的污染，而利用各蛋白质的差异将目的蛋白从其他蛋白中纯化出来。每种蛋白间的大小、形状、电荷、疏水性、溶解度和生物学活性都会有差异，利用这些差异可将蛋白从混合物如大肠杆菌裂解物中提取出来得到重组蛋白。

重组蛋白纯化常用的几个方法如下：

1.蛋白纯化色谱法：

色谱法无疑是下游处理中主要和常用的操作，因为色谱法相比其他单元操作具有某些优势。例如色谱法支持高分辨率的效率，可以分离分子性质非常相似的复杂粗制混合物。此外，色谱法是生物工艺中遇到的稀释溶液中捕获分子的理想选择。

柱色谱法(层析法)的原理是将一个大的蛋白池分离成许多小的蛋白池，其中一些富集了目标蛋白。虽然柱色谱法有昂贵的专业设备，但只需要基本的设备就可以了。

2.亲和色谱法：

亲和色谱法依赖于蛋白对基质结合配体的特异性和可逆性结合。该配体可以直接与目的蛋白结合或共价连接到蛋白的标签上与其相结合。亲和层析通常是最有效的纯化方法，通常用在纯化方案的早期阶段。这种特定的亲和相互作用能够捕获目标物，同时去除溶液中的污染物或其他分子，并一步富集或纯化目标分子，使其与其他不能结合配体的分子分离。

除了理论上蛋白能够通过免疫亲和色谱纯化之外，亲和法仅限于具有特异结合特性的蛋白，而免疫亲和色谱是所有亲和技术中特异性最高的。

3.离子交换色谱法：

离子交换色谱(IEX)是一种主要基于蛋白净电荷的色谱分离方法，通常用于追踪脱酰胺和琥珀酰亚胺的形成。IEX有两种类型：阳离子交换和阴离子交换色谱法。当缓冲液pH值高于此IP时，蛋白带负电（阴离子）；当pH值低于此IP时，蛋白带正电（阳离子）。

所有蛋白都表现出净电荷，这取决于蛋白氨基酸组成和任何共价连接的修饰。蛋白净电荷受溶解它的溶剂pH所影响，因为溶剂会与蛋白进行氢离子交换。通常情况下，蛋白与IEX的结合必须通过反复试验来确定，使用一系列pH值的溶剂以确定蛋白保留的最佳pH。通常溶剂的pH值与pI相差约一个pH单位就足以实现蛋白结合。

4.HPLC法蛋白纯化：

色谱法是一种常用分析技术，可以将混合物分离成单独的成分。高效液相色谱法通常称为HPLC，在化学生物学研究实验室中广泛应用。

在化学生物学中，单个分析物（如多肽）通常经色谱纯化后作为一种功能工具使用。高效液相色谱法(HPLC)是一种用于分析和分离液体样品的方法。在化学生物学实验室中，HPLC是纯化多肽（人工合成或用合成器自动合成）和其他中小型有机分子不可或缺的过程。它还允许使用颗粒非常小的柱填料，这就给固定相和流经它的分子之间产生相互作用提供了更大的表面积，这样可以更好地分离混合物的成分。

针对特定应用开发的HPLC色谱柱有很多种类，如正相HPLC(NP-HPLC)和反相HPLC(RP-HPLC)。正确选择色谱柱是获得良好的HPLC结果的关键。色谱柱的选择取决于我们希望分离的混合物的组分特性。

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