主题：【资料】多克隆抗体纯化的原理、流程和方法详解

浏览0 回复0 电梯直达

Ins_bf0c01c3

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

发表于：2023/10/31 15:58:05 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

多克隆抗体纯化原理是依据抗体的生物学特性，一般通过Protein A或Protein G的方法从动物血清中纯化抗体。但某些使用场景对抗体的质量要求很高，需要利用抗原亲和层析从总IgG抗体中进一步纯化和分离抗原特异性抗体，最终获得纯度高、非特异性背景低的多克隆抗体。

抗血清是一个非常复杂的混合物，包括血清的全部成分。抗血清被收集后，可通过硫酸铵沉淀法对其进行初步纯化，移除许多粘性蛋白，尽可能减少这些杂质对后续亲和层析纯化的影响。不同的纯化方法经常联合使用，用于从血清中纯化高质量的多克隆抗体。

①Protein A/G纯化

Protein A、Protein G和Protein L是三种细菌蛋白，具有能与抗体高效结合的特性。这些蛋白经过基因工程技术重组表达，常用于不同物种关键抗体类型的亲和纯化。

Protein A/G纯化是一种快速高效的多克隆抗体纯化方法，其原理是能与不同物种的IgG恒定区发生结合，从而除去血清蛋白和IgM抗体。应该注意的是，终产品包含总IgG抗体和特异性抗体。

义翘神州已生产了Protein A和Protein G琼脂糖纯化树脂，可用于纯化小鼠IgG2a/2b/3、大鼠IgG2c、人IgG1/2/4和兔IgG等多种来源的抗体。

②抗原亲和纯化

在Protein A/G纯化步骤后，抗原亲和纯化可进一步用于制备具有特异性高和纯度高的多克隆抗体。这种高灵敏度和高特异性的多克隆抗体适合用于IHC和IF等免疫学检测实验，即使在较低的稀释比下使用，也不会增加信号背景。

抗原亲和纯化，首先将抗原固定至树脂上，然后目的抗体与抗原发生特异性结合，最后洗脱得到目的抗体，以达到纯化多克隆抗体的目的。与Protein A法相比，此方法识别的是抗体的可变区，能高度识别和结合目的抗体，常用于多克隆抗体的纯化。

多克隆抗体的纯化主要包括以下几个步骤：

①收集细胞上清液或培养上清液：多克隆抗体是通过免疫动物（如小鼠、兔子等）产生的，因此首先需要收集包含抗体的细胞上清液或培养上清液。

②蛋白A/G层析：将收集到的上清液通过蛋白A/G层析柱进行纯化。蛋白A/G是常用于捕获免疫球蛋白的亲和色谱基质，可以选择性地结合抗体。

③洗脱：通过改变洗脱缓冲液的pH值或盐浓度等条件，将结合在蛋白A/G柱上的抗体洗脱下来。

④纯化筛选：使用各种纯化筛选方法，如凝胶过滤、离子交换层析、尺寸排阻层析等，进一步去除杂质并提高抗体的纯度。

⑤浓缩和储存：对纯化后的抗体进行浓缩处理，通常使用离心浓缩或超滤浓缩等方法。最后，将抗体在适当的储存缓冲液中保存，确保其稳定性和活性。

更多多克隆抗体纯化详情可以关注：https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/pab-purification