主题：【资料】重组蛋白常见问题权威解答

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发表于：2023/11/22 17:41:06 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

重组蛋白在生物医药领域的应用越来越广泛，然而，许多研究者在使用过程中可能会遇到各种问题。本文将对重组蛋白常见问题进行解析，包括其制备、纯化、保存以及应用等方面的问题，为您提供权威的解答和全面的指导。通过阅读本文，您将能够更好地理解和应用重组蛋白技术，提高研究工作的效率和准确性。

1. 如何生产重组蛋白？真核表达（酵母、昆虫和哺乳动物细胞）与大肠杆菌表达相比有什么优势？

我们的大多数重组蛋白都是在真核系统中生产的，分析证书中会为您提供有关单个产品如何生产的具体信息。真核生物作为表达系统有几个优势。

真核生物本身很少分泌原生蛋白，但却能分泌重组蛋白。因此，真核生物系统通常是分泌表达重组蛋白然后进行纯化。在大肠杆菌中制造的重组蛋白通常被定位在包涵体中。从包涵体中纯化重组蛋白需要在苛刻的条件下进行，然后再进行重折叠处理。这些苛刻的处理会对蛋白质的功能产生负面影响。

真核生物分泌的重组蛋白由高尔基体处理，因此可以进行翻译后修饰。这些修饰包括糖基化、磷酸化和硫酸化。有许多蛋白质需要经过修饰才能发挥功能、正常折叠或溶解。

真核生物没有像大肠杆菌那样的细菌细胞壁，因此不存在可影响目标系统炎症反应的内毒素（脂多糖）。

2. 当我打开小瓶时，什么也没看到。我怎么知道小瓶里有蛋白质？

打开小瓶之前要先离心！我们的大多数产品都是用低浓度缓冲液冻干的，因此几微克的产品可能不太明显。我们建议在打开前将小瓶放入微型离心机中离心 20-30秒，以将可能滞留在瓶盖或试管侧面的蛋白质离心到小瓶底部。我们的质量控制程序可确保每小瓶中的产品量正确无误。

3. 如何复溶冻干粉？重组蛋白f复溶可接受的体积是多少？重组蛋白复溶后的浓度是多少？

请查阅您的货物中包含的分析证书，以了解复溶方法，因为并非所有产品都在相同的条件下进行复溶。一般来说，我们建议使用无菌水进行复溶。将推荐体积的无菌水加入小瓶中，轻轻摇动以完全溶解蛋白质。不要涡旋。

重组蛋白的浓度取决于复溶体积。例如，如果在100μL载体蛋白溶液中复溶10μg重组蛋白，则浓度为10μg/100μL或100μg/mL。

4. 如何储存重组蛋白？重组蛋白的保质期多长？

若要长期保存，蛋白溶液应与载体蛋白（如0.1% BSA或0.1% HSA）一起以等分的形式保存，并在-20°C下冷冻保存。请注意，每次冷冻/解冻循环都可能导致蛋白质发生变性。除非分析证书上另有说明，大多数重组蛋白的保质期为一年。请按照分析证书上的规定在最佳储存条件下保存。

5. 什么是载体蛋白？

载体蛋白（如HSA或BSA）用于提高重组蛋白的稳定性，避免产品粘附在瓶壁上。

6. 如何确定重组蛋白的量？为什么我的检测结果与你们的结果不同？

我们通过BCA、SDS-PAGE、HPLC和其他方法确定重组蛋白的量。不同的检测方法会产生不同的定量结果。如果您采用不同的检测方法，有时差异会很大。蛋白质在储存过程中也有可能形成聚集体，从而在复溶和离心后造成损失。

7.义翘神州使用哪些标签进行蛋白质表达/纯化？如果我需要去除标签怎么办？

常用标签有His、Flag、Fc、GST、MBP、SUMO、Trx 等。我们的科研人员会根据蛋白质的特性和客户的具体要求，为不同蛋白推荐不同表达/纯化标签。一般，His是蛋白纯化的首选标签，它也可以与其他标签构建双标签表达。义翘神州提供广泛的蛋白生产和纯化服务，包括标签去除和内毒素去除等服务。

义翘神州提供从基因合成、载体构建到蛋白质表达、纯化的一站式服务，可以根据客户需求，选用不同表达/纯化标签、表达宿主等，真正为客户实现深度私人定制。多种纯化体系，为蛋白表达、纯化提供多种选择，帮助客户最大限度提高研究项目的成功率。如果对上述问题还有疑问，可以参看：重组蛋白表达纯化服务详情https://cn.sinobiological.com/services/recombinant-protein-expression-service