主题：【资料】重组蛋白的类型及常见问题解析

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发表于：2023/12/13 16:17:29 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

重组蛋白是生物科学领域的重要研究对象，其类型多样且具有广泛的应用。然而，在研究和使用过程中，人们可能会遇到各种问题。本文将对这些常见问题进行解析，以帮助读者更好地理解和应用重组蛋白。

重组蛋白的主要类型包括：

①生长因子：一组细胞间信号转导蛋白，由细胞产生并用于通信。其等可刺激多种细胞过程，包括细胞分裂、分化、迁移和存活。主要生长因子家族包括：

FGF：成纤维细胞生长因子

VEGF：血管内皮生长因子

神经营养因子：一个生长因子亚群，主要作用于大脑和神经系统相关的细胞

②细胞因子：包括对免疫细胞功能和通信至关重要的干扰素、白细胞介素、促炎性细胞因子和趋化因子

③酶：可进行化学转化的生物活性蛋白；包括重组蛋白酶、激酶和核酸酶

重组蛋白常见问题解析：

①如何准确评估重组蛋白的生物活性？

生物测定旨在测量给定生长因子或细胞因子的生物活性。在大多数情况下，生物测定是基于细胞的检测，会使用不同的指示细胞，例如原代细胞或细胞系。常用的生物测定包括细胞增殖检测、趋化作用检测、细胞因子生成检测和细胞毒性检测。给定细胞因子的生物活性以 ED50 表达，它代表诱导 50% 最大反应的细胞因子浓度。

②应如何有效地复溶重组蛋白？

首先，对容器进行离心，使粉末聚集在管的底部。我们通常建议将其复溶至 0.1 至 1.0 mg/mL 浓度。大多数蛋白可通过加入无菌蒸馏水复溶。但产品数据表或 CoA 将说明何时需要使用水以外的稀释液。也可在这些文档中找到推荐的溶液、载体蛋白浓度和扩展的储存条件。

③重组蛋白如何保存？

通常，我们建议将冻干重组蛋白储存在 –20°C 下，但可在 4°C 或室温下短期储存。复溶蛋白溶液时，我们建议您制备至少含 10 μL 蛋白溶液的工作等份试液，并在 –20°C 至 –80°C 下储存。不允许进行多次反复冻融。有关储存冻干和复溶重组蛋白的产品特定说明，请见产品手册、数据表或检验证书 (CoA)。

④在冻干重组蛋白瓶中未发现蛋白沉淀的可能原因是什么？

重组蛋白通常不含载体蛋白或添加剂（如 BSA、HSA、蔗糖等）。因此在冻干过程中，蛋白成品可能为薄薄的，有时肉眼不可见的薄膜形式沉积在小瓶上，而非颗粒状。沉淀物的大小（如果有）与样品瓶中的重组蛋白数量没有直接关系。

为确保蛋白产物的完全回收，在打开冻干重组蛋白瓶之前，建议对其进行离心 20–30 秒，以将可能残留在瓶盖或侧面的任何蛋白聚集到瓶底。复溶后，您可以通过在 SDS-PAGE 上运行少量产品来确认是否存在产品蛋白。通常来说，只要在丙烯酰胺凝胶上上样 10 ng 的蛋白，应该就能看到预期大小的蛋白条带。

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