主题：【原创】检测经验分享

1.配置培养基和氯化钠的用水：小厂很多不具备纯水，用自来水是可以，基本不影响结果，微生物检测所有用水临时用自来水代替不影响结果。

2.灭菌锅是老式怎么办：看压力表，注意要放冷空气，前面把放气阀开着，当开始持续冒气后关掉，待压力表升到0.05的时候开启放气阀放掉全部气，冷空气基本就全部放完了。然后盯着压力表，待压力表升到0.13以上，最好不超付0.15的时候开始开启放气阀，压力回到0.12，不要低于0.10，时候关掉放气阀，持续过程25分钟以上，可保证灭菌彻底。时间再长点也不会影响培养基质量。灭菌完成后，不要马上卸压，关掉电源，让灭菌锅自己降温吧。当然万一时间赶，也可以直接卸压，不过可能会导致培养基喷出来。
3.可不可以不包牛皮纸：我比较懒，手工活也差，不会包牛皮纸。现在有石棉塞，塞好后，是可以不包牛皮纸的，石棉塞保护下，是可以隔绝外部细菌的。当然前提时，尽量减少在恶劣环境下久放。理想是灭菌完成后赶紧放在传递窗口里面。传递窗做好灭菌即可。

4.培养基和氯化钠浓度需要精确吗：我很懒，图快，氯化钠凭感觉配，0.7-1.2%之间，没多大影响。培养基，手抖多放了点，烧杯手抖，水多放了点，也没太大影响。当然此处不建议你们干，我是为了节约时间和试剂，手抖了总不能倒掉吧！

5.没有无菌操作台和无菌室怎么办：条件允许下，找一间没有人的房间，放一张干净的桌面，关闭窗户，提前一天用高浓度的84拖地擦洗，然后熏蒸。条件再允许就用臭氧熏蒸2小时以上，试验前再用酒精擦拭桌面，可以基本保证室内无菌，进房间前换好衣服，做实验动作轻点，可以保证实验是成功的。再不济就在试验台附近放一个酒精灯，但是注意不要太靠近，别把你实验的带菌烧死了。

6.大肠杆菌用哪个好：怎么说呢，我个人喜欢平板法。一般来说，比较的干净的产品，平板上不会有菌落，就可以直接报＜10，不太干净的产品，平板上会有，经验多的，能肉眼看个七八成，不用做第二步验证就能猜测出来大肠杆菌的量。对于大部分企业来说，微生物是不需要知道具体的数值的，对于老板来说，只需要汇报，超标或没超标。另外条件比较差的情况下，大肠杆菌是可以直接在干净的室外倾倒平皿的。

7.器皿怎么灭菌：很多人喜欢干灭，原因可能是以前没有培养皿桶和移液管桶，用牛皮纸包着放恒温箱里面方便点。但是实际上，湿灭效果更好，而且花的时间更低。买一个培养皿不锈钢桶，将培养皿放入121度20分钟灭菌，胶头滴管放烧杯，牛皮纸封住，移液枪放桶或者牛皮纸包裹着，全部湿热。湿热后不用处理器皿上残留的水，不会影响结果。

8.没有恒温水浴锅怎么看培养基温度：可以用额温枪测温，一般温度为55度就可以开始实验了，等到了倾倒那一步，温度就差不多降到45度左右了。如果额温枪也没有，手摸，哈哈，握住不要放，能忍受就说明温度在50度以下，小姑娘的嫩手说明温度刚刚好。

9.怎么防止培养基喷出：先用烧杯加热，加热的过程中不断搅拌，当看到有泡沫出来，马上关火或者移开烧杯，待泡沫降下去再开启加热，然后重复之前动作2次，之后PCA就基本不会喷出了，PCA一般就是刚沸腾时容易喷出，前面关火降温让其不喷出，后面就不会再喷了。VRVA不一样啊，会一直喷，还很容易喷，所以沸腾好后改小火，快喷了就移开火源。

10.灭菌锅内怎么防止喷管：有人说，包牛皮纸，包紧点，但是我不喜欢包，也不用包。将生理盐水加热至沸腾然后马上塞胶塞，培养基也如此。试管内生理盐水用热水，保持瓶内管内有一定的负压即可。在加热前可以先将灭菌锅开着，让灭菌锅内的水也是热水，就行了。

11.培养室需要灭菌吗：有人喜欢一到晚上就把整个理化室灭菌灯开着，这样其实不好，紫外线会产生一定浓度的臭氧，臭氧可能会逸散到培养箱中影响正在培养的细菌，可能会影响结果。所以灭菌仅仅针对无菌室即可。培养箱一般来说，一月清洗一次，先用干净抹布擦拭，再用酒精擦拭一遍即可。

12.移液枪需要灭菌吗：不建议，容易老化移液枪。保证无菌室干净，移液枪带菌可以忽略。
13.无菌室灭菌：首选臭氧，其次84熏蒸，最后才是紫外线。

14.实验中最容易污染的因素：永远是手部，当接触试样之后，用酒精消毒一次。手部用于是最大的污染源。