首先，需要根据分离样品的特性和目的，选择合适的流动相和柱子。在确定流动相时，需要考虑其极性和溶解性，以及不同成分之间的相容性。在选择柱子时，需要考虑其填充材料、粒径和长度等参数，以及样品的分子量和化学性质。

其次，需要确定梯度程序的起始浓度、结束浓度和梯度时间。起始浓度应选择与样品相似的极性组分，以保证柱子的稳定性和分离效果。结束浓度应选择与样品极性相反的组分，以促进样品分离。梯度时间应根据柱子的长度和流速等参数进行合理设置，以避免柱子过早饱和或过度扩散。

最后，需要进行优化和调整。在实验中，可以通过调整梯度程序的参数、流速和温度等因素，来优化分离效果和保证柱子的寿命。同时，需要注意样品的洗脱和回收，以避免浪费和环境污染。

总之，液相色谱梯度设置是一项复杂而关键的工作，需要仔细考虑和实验验证。只有合理设置梯度程序，才能获得高效、准确的分离结果。

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2024/3/12 10:55:16 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

液相方法开发时梯度如何设置？对于液相方法开发时的梯度，优先选择等度洗脱，特别是单个化合物或者化合物数量较少时，如果等度洗脱分不开后才会考虑梯度洗脱，遵循由简单到复杂的原则。

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JOE HUI

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2024/3/12 12:10:49 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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xiaolanzi5

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2024/3/12 18:28:55 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

方法开发以快速，准确，有效为目的。在杂质不干扰目标峰的前提下，分析时间越短越好。

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Ins_2e1e84f3

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2024/3/15 10:21:15 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

1.待分析的物质是否已知结构，如果已知结构，就可以根据结构，推断物质的极性、溶解性、pKa紫外吸收波长等性质；如果未知结构，那就只能一点点去尝试。2.走一个5%甲醇—100%甲醇梯度，10-15min，观察出峰情况，判断目标物出峰的大致甲醇浓度。3.以以上判断的甲醇比例±20%为起止梯度，再走一个10-15min的梯度，进一步细化暮边屋出峰的甲醇比例。4.观察出峰数目和峰保留时间的差异，如果峰数量少，且分的很开，可以考虑等度洗脱。根据第3步判断的甲醇比例，±10%，为等度洗脱比例，观察出峰情况。尽可能保证分离度的情况下，以最短时间走完样品。5.如果出峰数量多，且部分峰的分离度不好，就要考虑梯度变化率、多梯度等，甚至从洗脱剂、添加缓冲盐、离子对试剂等等角度考虑优化。

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