主题：【分享】【我们不一YOUNG】制备培养基的一般流程和注意事项

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发表于：2024/07/17 15:11:01 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

制备培养基的一般流程包括称量、?熔化及调pH、?分装、?包扎，?以及灭菌等步骤。?

称量：?首先，?根据培养基的配方，?准确称取各种药品。?对于用量较少的药品，?应先配制成溶液后再加入。?这一步骤要求精确，?因为即使是微小的误差也可能影响培养基的最终效果。?

加水：打开灭菌锅盖，向锅内加水到水位线。立式消毒锅最好用已煮开过的水，以便减少水垢在锅内的积存。注意水要加够，防止灭菌过程中干锅。装料、加盖灭菌材料放好后，关闭灭菌器盖，采用对角式均匀拧紧锅盖上的螺旋，使蒸汽锅密闭，勿使漏气。

排气：打开排气口（也叫放气阀）。加热，待水煮沸后，水蒸气和空气一起从排气孔排出，当有大量蒸汽排出时，维持5min，使锅内冷空气完全排净。

升压、保压和降压：当锅内冷空气排净时，即可关闭排气阀，压力开始上升。当压力上升至所需压力时，控制电压以维持恒温，并开始计算灭菌时间，待时间达到要求（一般培养基和器皿灭菌控制在121℃，20min）后，停止加热，待压力降至接近“0”时，打开放气阀。注意不能过早过急地排气，否则会由于瓶内压力下降的速度比锅内慢而造成瓶内液体冲出容器之外。

熔化及调pH：?将称量好的药品加入少量水（?通常是所需水量的一半）?中溶解，?加热至琼脂全部溶解，?并补足所需的全部水量。?使用1mol NaOH和1mol HCl调节pH至要求值。?这一过程中需要注意在加热熔化琼脂时要不断搅拌，?以防糊底。?

分装：?将熔化并调整好pH值的培养基使用分装器分装入试管或三角瓶中。?分装时要注意不要让培养基沾染试管口或瓶口，?以防培养过程中容易污染杂菌。?

包扎：?将分装好的试管和三角瓶塞上棉塞，?棉塞外包一层报纸，?用绳子扎好，?以防止外界杂菌的污染。?

灭菌：?完成包扎后，?对培养基进行灭菌处理。?灭菌是确保培养基无菌的重要步骤，?通常使用高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽消毒器进行灭菌。?

灭菌后的培养基空白培养：灭菌后的培养基放于37℃培养箱中培养，经24h培养无菌生长，可保存备用；斜面培养基取出后，立即摆成斜面后空白培养；半固体的培养基垂直放置凝成半固体深层琼脂后，空白培养。

干热灭菌法：通过使用干热空气杀灭微生物的方法叫干热灭菌。一般是把待灭菌的物品包装就绪后，放入电烘箱中烘烤，即加热至160-170℃维持1-2h。干热灭菌法常用于空玻璃器皿、金属器具的灭菌。凡带有胶皮的物品，液体及固体培养基等都不能用此法灭菌。

灭菌前的准备：玻璃器皿等在灭菌前必须经正确包裹和加塞，以保证玻璃器皿于灭菌后不被外界杂菌所污染。常用玻璃器皿的包扎和加塞方法如下：平皿用纸包扎或装在金属平皿筒内；三角瓶在棉塞与瓶口外再包以厚纸，用棉绳以活结扎紧，以防灭菌后瓶口被外部杂菌所污染；吸管以拉直的曲别针一端放在棉花的中心，轻轻捅入管口，松紧必须适中，管口外露的棉花纤维统一通过火焰烧去，灭菌时将吸管装入金属管筒内进行灭菌，也可用纸条斜着从吸管尖端包起，逐步向上卷，头端的纸卷捏扁并拧几下，再将包好的吸管集中灭菌。

干燥箱灭菌：将包扎好的物品放入干燥烘箱内，注意不要摆放太密，以免妨碍空气流通；不得使器皿与烘箱的内层底板直接接触。将烘箱的温度升至160-170℃并恒温1-2h，注意勿使温度过高，超过170℃，器皿外包裹的纸张、棉花会被烤焦燃烧。如果是为了烤干玻璃器皿，温度为120℃持续30分钟即可。温度降至60-70℃时方可打开箱门，取出物品，否则玻璃器皿会因骤冷而爆裂。用此法灭菌时，绝不能用油、蜡纸包扎物品。

火焰灭菌：直接用火焰灼烧灭菌，迅速彻底。对于接种环，接种针或其它金属用具，可直接在酒精灯火焰上烧至红热进行灭菌。此外，在接种过程中，试管或三角瓶口，也采用通过火焰而达到灭菌的目的。

结果：记录各种不同物品所用的灭菌方法及灭菌条件（温度、压力等），记录高压蒸汽灭菌的过程及注意事项。

注意事项：?

在整个制备过程中，?要确保使用的化学药品是化学纯的，?以避免对细菌生长造成不利影响。?

使用的蒸煮锅不应为铜锅或铁锅，?以防微量金属混入培养基中。?

灭菌前，?玻璃器皿等必须经正确包裹和加塞，?以保证灭菌后不被外界杂菌所污染。?

灭菌后的培养基应进行空白培养，?以检查是否无菌生长，?确保培养基的质量。

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