主题:【已应助】紫外分析仪检测DNA样品

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cmiw12
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请高手指教,用紫外分析仪进行DNA和RNA检测是怎么回事,大概是哪些波段的呢;有原来的同事去到一个分子生物相关的实验室了,让帮忙选紫外仪器说是用来检测DNA和RNA样品,这个完全没有接触过,查了查好像有专门的DNA检测仪器,跟用紫外有啥不同吗?
推荐答案:123回复于2024/07/23
紫外分析仪在进行DNA和RNA检测时,主要是利用这些分子在特定紫外波段的吸收特性来进行定量分析。DNA和RNA分子中的碱基,尤其是嘌呤和嘧啶,能够吸收紫外光,其吸收峰值通常在260纳米(nm)左右。因此,紫外分析仪通常使用以下两个主要的紫外波段:
1.?UV-C(短波紫外):波长在100-280 nm之间,但在这个范围内,DNA和RNA的吸收主要发生在260 nm,因此这个波段对于核酸检测尤为重要。
2.?UV-A(长波紫外):波长在315-400 nm之间,这个波段通常用于检测蛋白质或其他分子,因为它们在这个波段也有吸收峰。
紫外分析仪检测DNA和RNA的基本原理是测量样品在260 nm处的吸光度(A260),然后根据吸光度计算出样品中的DNA或RNA浓度。此外,通过测量样品在280 nm处的吸光度(A280),可以评估样品中蛋白质的污染情况,因为蛋白质在这个波段也有较高的吸收。

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JOE HUI
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楼主说的是多功能紫外检测仪吧,多功能紫外分析仪采用不同波长的紫外光对DNA、RNA电泳凝胶样品进行观察拍照、检测蛋白质、核甘酸、适用于核酸电泳分析、检测,PCR产物检测,DNA指纹图谱分析,纸层分析或薄层分析等。
无需在暗室操作,便可对电泳凝胶进行紫外观察和照相,也可对蛋白进行观察和照相,紫外强而均匀。
分析观察样品:如果是进行凝胶观察,建议选用波长302nm,此时请将波长选择开关302nm按开,观察中强度做准备凝胶样品,用于制备观察以及切割等操作,以减少紫外线对DNA 的损伤,此时请将波长开关365nm或254nm打开。选择好合适的波长后,您就可以进行凝胶的观察、分析和切割等操作。紫外分析仪采用石英玻璃紫外灯管及滤光片组成,两组光源的波长分别为254nm和365nm。光源经滤光片滤色即可用于实验,两种光源既能单独使用亦可同时混合使用。
123
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紫外分析仪在进行DNA和RNA检测时,主要是利用这些分子在特定紫外波段的吸收特性来进行定量分析。DNA和RNA分子中的碱基,尤其是嘌呤和嘧啶,能够吸收紫外光,其吸收峰值通常在260纳米(nm)左右。因此,紫外分析仪通常使用以下两个主要的紫外波段:
1.?UV-C(短波紫外):波长在100-280 nm之间,但在这个范围内,DNA和RNA的吸收主要发生在260 nm,因此这个波段对于核酸检测尤为重要。
2.?UV-A(长波紫外):波长在315-400 nm之间,这个波段通常用于检测蛋白质或其他分子,因为它们在这个波段也有吸收峰。
紫外分析仪检测DNA和RNA的基本原理是测量样品在260 nm处的吸光度(A260),然后根据吸光度计算出样品中的DNA或RNA浓度。此外,通过测量样品在280 nm处的吸光度(A280),可以评估样品中蛋白质的污染情况,因为蛋白质在这个波段也有较高的吸收。

ztyzb
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楼主参考:
微量紫外分光光度法检测的是核酸的纯度和含量,DNA和RNA在260nm处有最大的吸收峰,蛋白质在280nm处有最大的吸收峰,盐和小分子则集中在230nm处。因此,可以用260nm波长的吸光度测定DNA或RNA浓度,其吸收强度与DNA和RNA的浓度成正比。
对于一个核酸样品,建议先电泳检测,再用紫外分光光度仪检测,电泳可以判断样品是否提取成功,以确认是否还需进行纯度和浓度测定。
核酸浓度计算
针对不同类型的核酸,其浓度的计算方法也并不相同:
dSDNA = 50 × (A260-A310) × 稀释倍数 (ng/μL)
ssDNA = 33 × (A260-A310) × 稀释倍数 (ng/μL)
RNA = 40 × (A260-A310) × 稀释倍数 (ng/μL)
双链DNA纯品的A260/A280为1.8,RNA纯品的A260/A280为2.0,故根据A260/A280的值可以估计DNA的纯度。
合格的双链DNA的A260/A280应在1.7~1.9之间,若比值较高说明提取的DNA中有RNA残留,若比值较低说明有蛋白质残留。
合格的RNA的A260/A280应为1.9-2.1之间,如果小于1.8,则表明提取的RNA中蛋白质杂质较多,如大于2.2,则表明RNA发生了降解。
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