主题：【讨论】色谱积分的管理，你们被提过缺陷吗？

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发表于：2024/09/14 09:27:27 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

在色谱的检测过程中，如何对色谱峰进行正确、合理、合规的积分，对数据结果的准确性和一致性非常关键。分析检测人员不规范的积分操作有可能会导致数据结果受到干扰。这常常也是监管核查数据时必看的重点。所以色谱积分的管理尤为重要。本篇讲一下色谱积分的管理，以化药色谱积分为例，生物药或其他行业检测可以参考。色谱积分是指色谱软件定量测定峰面积或峰高的过程。
色谱图的积分分为自动积分和手动积分两种，一般情况下均采用自动积分的方式对图谱进行积分。若必须手动积分，则需首先进行申请，被许可并确认后方可操作。
一、自动积分1、自动积分原则1.1使用积分事件完成数据处理。采用内标与外标计算时，对照品与供试品的斜率与峰宽必须保持一致。1.2同一序列或同时、非同一序列连续进样采集的色谱图属于同一检测项目的，使用相同的积分事件进行处理；同一序列或同时、非同一序列连续进样采集的色谱图属于不同检测项目的，可以按照项目使用不同积分事件进行处理；同一序列中属于同一检测项目的所有对照品和供试品等（不包括系统适用性），均按同一积分方法处理。2、积分处理方法的命名原则2.1一般积分处理方法命名：起始物料/中间体/原料药/制剂简称+空格+检测项目简称+空格+“PM”，有多次处理时，在“检测项目简称后”+“-” +流水号（1、2、3…）。2.2耐用性试验样品的处理方法命名：起始物料/中间体/原料药/制剂简称+空格+检测项目简称+“-”+“RB” +“（条件）”+空格+ “PM”。2.3系统适用性溶液的处理方法命名：当系统适用性溶液与样品处理方法不同时，在常规方法后+“SST” +空格+ “PM”。2.4处理序列的命名：在分析序列后+“-”+“P”。3、处理方法：每个序列积分处理前可调用之前的处理方法另存为新的处理方法（对于不影响积分数据结果的修改，如修改时间窗，则无需另存），然后打开此新处理方法修改积分参数，并逐个图谱查看积分是否合适，确认后保存。4、图谱的存储形式：对序列进行积分处理后，查看结果，如果合适，根据情况直接打印成纸质版，或打印成PDF文件保存于相应项目文件夹下，需要时打印成纸质版。5、色谱峰识别和处理的一般要求5.1原料药和产品中所有检出的已知杂质，应对其色谱峰进行准确积分，报告杂质含量。5.2原料药和产品中检出的未知杂质，当其含量大于或等于主成分0.05%（该数值大小视具体方法的灵敏度决定）时，应对色谱峰进行准确积分，报告杂质含量。5.3可确定的溶剂峰、空气峰、辅料峰或由仪器因素产生的色谱峰，可不做积分处理。
6、积分参数设置6.1积分方法参数设定要求：一般根据保留时间确定峰，斜率和峰宽。6.2针对含量、溶出度等的色谱图，一般常用的参数设置有如下4项（供参考）：其余参数均为默认值即可。
7、积分事件中应注意的事项及示例7.1积分事件的设置应使需要的最小组分也能得到满意的结果7.2调节色谱图坐标的大小，使色谱峰的起始点、基线都能被准确识别和观察。7.3使用默认积分参数对色谱峰进行积分处理，检查每个色谱峰的起点、终点、基线是否准确绘出。7.4当色谱峰的起点、终点、基线没有被准确绘出，色谱峰没有被准确命名时，可调节斜率、峰宽、时间性积分事件等积分参数，或调节时间窗口的大小，使之符合要求。7.5对未完全分离的杂质进行积分，当其峰高接近时，需要使用垂线积分。7.6某些情况下，在目标峰峰前或峰后有轻微的干扰峰，这些干扰峰没有完全与目标峰分离，并可能自动积分计入目标峰中。7.7色谱峰（通常为主峰）拖尾部分的有关物质，应调整积分参数，使该部分有关物质正确积分。7.8在某些情况下，由于色谱峰拖尾，原本属于该色谱峰的拖尾部分被切去了，此时应调整积分参数，使积分符合要求。7.9当积分参数设置不正确时，可能会导致色谱峰基线被提高，此时应更改积分参数，如减小阈值，使积分符合要求。7.10当色谱峰因为基线噪音的影响而导致没有正确积分时，应调整斜率或缝宽，使积分符合要求。7.11若基线也被计入色谱峰，可通过增加斜率或减小峰宽获得准确的积分。。7.12由于基线噪音导致峰谷到峰谷积分质量低下，此时应除去与基线波动相关的面积，并只对目标峰进行积分。7.13在峰的尾部发生共洗脱而导致多余面积被纳入结果计算。积分应该在保证峰形的前提下除去额外的区域。7.14当检测器噪音大时，积分位置的基线过高，且由于噪音在峰的顶端外而导致峰被分裂。正确的积分应包括除去基线噪音外所有合理的属于该峰的峰面积。
二、色谱图的重新/手动积分1、重新积分：指检验人员或其他人员在检测完毕，图谱积分处理完成并保存以后，发现积分不正确或其他问题，再调整积分参数，进行处理的自动积分，属于自动积分范畴。基于项目需要，规定在检测处理完成后进行的重新积分，需要填写《色谱图重新/手动积分申请表》，经分析部门负责人批准后，再进行重新积分操作。2、色谱图手动积分2.1仅当检验方法要求或者自动积分不能正确积分时，才能使用手动积分。2.2手动积分原因分类（1）低分离度或低响应（2）流动相不稳定，基线紊乱，保留时间变化；（3）运行过程中出现异常峰；（4）软件积分的局限性，如由于软件参数阈值的设臵导致峰未积分，峰起点和终点间出现肩峰和异常的基线漂移，软件错误（峰未积分和错误识别峰）；（5）由于样品本身的干扰导致的复杂色谱图：裂峰、目标杂质的同时洗脱/肩峰、基线噪音、负峰、基线上升或下降（由于某些梯度程序所致）、峰的严重拖尾或峰前延等导致自动积分不正确。2.3手动积分流程及操作（1）检验人员在处理某产品检验批次数据时，需要进行手动积分时，先报告分析部门负责人，经核对后决定是否需要进行手动积分。（2）如果需要手动积分，检验人员填写《色谱图重新/手动积分申请表》，经分析部门负责人确认并批准后，由具有手动积分权限人员完成手动积分操作。（3）手动积分结束后，自动积分的图谱不得删除或被覆盖，应与手动积分图谱一起保存于计算机中，打印出自动积分图谱和手动积分图谱，打印的自动积分图谱和手动积分图谱应标识清楚，并签名，随同手动积分申请表一起附于检验原始记录，复印件交分析部门负责人审核签字，然后由研发QA审核，无问题后由QA归档。2.4色谱系统软件采用既定的积分参数积分不正确，需要采用手动积分处理的，或个别图谱需增加使用积分程序部分功能的，也需申请和批准。3、手动积分方法（1）放大图谱，辨别是否是基线噪音。（2）手动积分类型：“谷”到“谷”（“基线”到“基线”）。聚合物一般按“基线”到“基线”方式，有关物质中未分开的杂质用切割的方式（做法：从以第1峰起点到第2峰终点为基线，以交叉点为切割点与基线垂直切割）。有质量标准规定的按照质量标准执行。（3）检验员必须以正确的方式进行手动积分。将峰面积去掉（峰消除）、“添加峰”、“峰扩大”和“改变峰高”的手动积分都不符合标准。4、手动积分的注意事项（1）手动积分不能试图通过以下动作来使数据符合标准要求：减少峰（减少峰面积）；增加峰（增加峰面积）；改变峰高。（2）若分离度不好或响应不好，应查找问题，做出整改，建立预防措施，而不是直接要求手动积分。5、重新/手动积分的资料归档由研发QA对《色谱图重新/手动积申请表》进行整理和归档，并登记。以上积分规定适用于在分析方法确定后的检验中所涉及的色谱的所有积分，不适用于分析方法的开发阶段和样品的试制阶段。大家对于色谱积分的管理还有什么建议或经验分享呢？欢迎评论区留言。

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