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主题：【原创】质谱如何鉴定蛋白

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发表于：2024/09/19 10:43:18 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
质谱如何鉴定蛋白
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2024/9/19 19:46:18 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
?质谱技术通过将蛋白质分子转化为离子，并利用质谱分析仪的电场、磁场将具有特定质量与电荷比值(M/Z)的蛋白质离子分离开来，经过离子检测器收集分离的离子，确定离子的M/Z值，从而分析鉴定未知蛋白。?

质谱鉴定蛋白质的过程主要包括以下几个步骤：

?蛋白质样本制备?：包括简单和混合复杂蛋白质样本的制备，简单样本如纯化蛋白质，而混合蛋白质样本则包括多种蛋白质的混合溶液或SDS-PAGE胶条带等。

?蛋白质酶解?：由于蛋白质质量较大不利于直接鉴定，因此需要使用蛋白酶将蛋白质消化为小片段肽段。常用的酶是胰蛋白酶，它在蛋白质的赖氨酸和精氨酸处将其切断，形成6-20个氨基酸的多肽段，这些多肽段用于后续的质谱鉴定。

?质谱分析?：质谱分析可以通过不同的技术进行，包括基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF)和电喷雾离子化质谱(ESI-MS)等。MALDI-TOF通过激光照射使蛋白质与基质分子解吸并电离，形成带电离子，而ESI-MS则是通过高电压使液态样品带电，形成细小的带电液滴，随着溶剂蒸发，液滴崩解为大量带电的离子。

?数据库检索与蛋白质鉴定?：通过质谱分析得到的数据与数据库中的数据进行比对，以确定蛋白质的身份。这包括一级质谱和二级质谱的分析，一级质谱形成肽指纹图谱(PMF)，而二级质谱则通过挑选一级质谱中的代表性母离子峰进行碰撞诱导解离，形成肽段碎片指纹图谱(PFF)。最后，通过数据库搜索，获取蛋白质的具体鉴定信息。
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