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主题：【分享】免疫共沉淀实验原理及详细步骤

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发表于：2024/10/26 11:02:51 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
?免疫共沉淀实验（Co-Immunoprecipitation，简称Co-IP）?是一种用于研究蛋白质之间相互作用的方法。其基本原理是通过抗体特异性地识别目标蛋白质，利用抗原-抗体反应将目标蛋白及其相互作用蛋白一起沉淀下来，从而分析它们之间的相互作用。

实验原理

免疫共沉淀实验的核心是通过抗体来特异性识别候选蛋白质。首先，将靶蛋白的抗体通过亲和反应连接到固相基质上（如琼脂糖珠），再将待筛选蛋白质加入反应体系。在固体基质和抗体的共同作用下，能够与靶蛋白发生相互作用的蛋白质被分离出来?。

详细步骤

  • ?细胞裂解?：将待研究的细胞在非变性条件下裂解，以保留细胞内蛋白质的天然状态和相互作用。
  • ?抗体结合?：将靶蛋白的抗体预先固定在固体基质（如琼脂糖珠）上，然后将细胞裂解液加入反应体系。
  • ?蛋白质复合物沉淀?：通过离心或微膜过滤法，将蛋白质复合物沉淀到固体基质上。能够与靶蛋白发生相互作用的蛋白质会被一起沉淀下来。
  • ?洗涤?：去除非特异性结合的蛋白质，确保沉淀下来的主要是与靶蛋白相互作用的蛋白质。
  • ?洗脱和检测?：将沉淀下来的蛋白质复合物从固体基质上洗脱下来，通过Western Blotting（免疫印迹）等方法检测目标蛋白及其相互作用蛋白的存在。
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