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主题：【讨论】吸光度法测定酪氨酸酶活力

浏览0 回复7 电梯直达
lzx3000
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发表于：2008/01/23 10:45:33 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
酪氨酸酶活力的测定，文献中报道的方法如下：测定波长475nm的吸光值随时间增长直线，从直线斜率求得酶活力，消光系数按E=3700mol-1L.cm-1计算。
但是我不明白通过吸光值对时间的直线斜率怎么求得酶活力？还有为什么要指定消光系数?计算过程中有什么作用？
希望得到高人的指点阿
问题补充：我测定时酪氨酸酶用的是mushroom tyrosinase,以酪氨酸为底物，475nm处测定吸光度是基于生成的dopachrome量。
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2008/1/23 14:38:26 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
酶活力的大小可用在一定条件下，酶催化某一化学反应的速度来表示。测定酶活力实际就是测定酶促反应的速度。酶促反应速度可用单位时间内、单位体积中底物的减少量或产物的增加量来表示。在一般的酶促反应体系中，底物往往是过量的，测定初速度时，底物减少量占总量的极少部分，不易准确检测，而产物则是从无到有，只要测定方法灵敏，就可准确测定。因此一般以测定产物的增量来表示酶促反应速度较为合适。
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huangza
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2008/1/23 14:45:20 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
在测定条件下，1min水解酪蛋白释放的三氯乙酸可溶物，在280nm时吸光度与1μg的酪氨酸吸光度相当时，所需要的酶量为1个酶活力单位，U/g。
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zam0825
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2008/1/23 15:06:51 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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zhouyuhu
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2008/1/23 21:41:58 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 zam0825 发表:
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您的底物是什么，按照米氏方程得出的结论，上大学学过，现在还给老师了
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zam0825
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2008/1/24 8:00:26 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 zhouyuhu 发表:
原文由 zam0825 发表:
看看这篇文章,或许有帮助
http://www.lababc.com/literature/Article_Show.asp?ArticleID=7283

您的底物是什么，按照米氏方程得出的结论，上大学学过，现在还给老师了

原帖已经写了,以酪氨酸为底物。
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燕子haha
v2802294
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2013/10/9 16:43:42 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
楼主 你好，想请教一下以酪氨酸为底物测定酪氨酸酶的话，底物浓度和量是怎么确定的？
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Spain
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2013/10/10 9:51:50 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
IFCC不是有类似的标准规程吗?

我感觉就是仪器动力学扫描，得到吸光度的变化率，除以时间，结果再乘以个系数。
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2013/10/10 9:53:40 Last edit by spain
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