各位老师,本人在工作中遇到一个问题想请教大家,在使用
液相色谱分离目标物质时,目标物的出峰时间很短,我大致计算了一下,应该是小于死时间的,这样的话是不是说这根色谱柱基本上和我的目标物没有发生什么相互作用就流出了?
我给出具体参数,大家帮我看看我算的对不对!
柱子是Agilent的反相液质柱,参数如下:2.1*150mm 5um 我使用的流速是200ul/min
我大致按照经验公式计算如下
Tm=(柱长度*柱截面积)/流动相流速
3.14*(0.21/2)2*15=0.519
0.519/0.2=2.60min
现在我的两个目标物质的出峰时间大约在2min,这样可以说这根柱子基本上没有分离我的目标物吗?
在此之前,我尝试了各种流动相和梯度,但是效果不明显。
我也找了本版的相关信息来看,但是对于别人提到的那个流速单位心存疑虑。
还望各位老师不吝赐教!
附上我找到的帖子:
在HPLC分析中死时间Tm的测量
在HPLC分析中,死时间Tm的测量是一个比较困难的问题,这也直接影响了高精度kovats保留指数在HPLC中的应用。死时间表示了一个在高效
液相色谱固定相上未被滞留组分的保留时间,由于高效
液相色谱立法的多样性,很难找到像
气相色谱那样选择空气或甲烷为测量死时间的通用探针,其实平时分析时用这个死时间的意义不大,我觉得你知道就行!但我还是告诉大家如何来测。
1.由色谱柱的结构参数进行计算
Tm=(柱长度*柱截面积*总孔率)/流动相流速
其中柱长度为cm,柱截面积为cm2,总孔率(对全多孔固定相为0.84,对化学我键合和离子交换为0.75),流速cm3/s
2.用色谱柱的操作参数进行计算
Tm=(柱阻抗因子*流动相动力粘度*柱长度的平方)/(柱压力降*固定相粒径)
3.依据经验公式计算
(1)对全多孔固定相
Tm=(柱长度*柱内径的平方)/(1.5*流速)
(2)对非多孔固定相
Tm=(柱长度*柱内径的平方)/(3.0*流速)