主题：【分享】大家图谱来找茬(第二季)【板油分享】

首先感谢以下板油对本次活动的支持：
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大家图谱来找茬(第二季)
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要求:1.找出图谱中存在的问题(越多越好噢!)
2.图谱中一个主要问题是基线漂移(在图谱两端基线很平,中间峰却漂移的很大,最小漂移为50左右,最大的有150).
针对峰的漂移你有什么好的建议嘛?
3.如果要对图中的两个峰(图谱中峰1、峰2)进行含量测定,你觉得应该怎样改善条件才可以更好的进行定量分析.
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目的：研究某一个厂家注射液的指纹图谱。
色谱条件为:Eclipse XDB-C18（ODS-2，250×4.6 mm，5 μm）,甲醇-5％乙酸梯度洗脱,温度:25℃,检测波长:284nm;流速1.0ml/min.进样量:10ul.
检测样品：某厂复方注射剂.
梯度表如下：

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图谱如下:



◆◆◆◆板油回答◆◆◆◆

juju11：
1. 走梯度基线漂移是会有的，而且从你的图谱中看漂移也不是很明显，如果想改善，甲醇可以换成乙腈试试，不过成本会比较高。
2. 样品出峰的时候，最好不要在梯度变化的时候，这样重现性可能不太好，而且基线很可能处在上升或下降的过程，基线是倾斜的。我们一般是在样品出峰前几分钟前就将流动相稳定在某一比例，等出完峰再改。
3.柱温可以适当提高，在没有样品出峰的时候，有机相比例可以适当调高一些。
4.走梯度，如果只是要定量，不是要求指纹图谱的话，起始比例可以采用第一个所需的峰刚好和周围的峰分开时的流动相比例来定，等到第一个峰出完或者在出峰前改变有机相比例（就算改了有机相比例也不会影响到将要出的峰），比例至多少要根据你要的下面的化合物的性质等决定。原则上有机相改变的跨度要达到一个平衡：即下面峰的出峰时间长短、峰形好坏、梯度返回平衡的时间长短三者能够达到一个较好的平衡点。
5.如果要指纹图谱，而且用其中的一两个峰定量，那么走梯度还要尽量使每个峰分开。某些液相的工作站可以设定不同形式的梯度曲线（凹形和凸形），而不是直线形式改变梯度，使用的原则就是要使峰密集的地方流动相改变缓慢些，峰稀疏的地方流动相改变快些。
6.走中药一定要注意，因为中药中成分复杂，如果连续进样，为了防止有鬼峰出现，你最后的有机相比例最好设定高一些，并且走上一段时间，再回低有机相平衡。走完第一针，最好走一针空白溶剂，看看会不会有峰干扰你下面的进样。

下面再来看看你的梯度：
1.如果你不要指纹图谱，那么起始有机相的比例完全可以提高一些，只要能确保峰1和周围的峰分开就行。
2.峰1走完后可以迅速切换到峰2所需的比例，但是从图上看峰2似乎包裹了一个小峰，这时的有机相比例应该在摸索一下，最好能分开，流速也可以适当降低些。峰2出完后可以再迅速切换到下一个高些的有机相比例走上一段时间，让后面的峰尽快出尽。
3.最后你的梯度要回到起始比例，且平衡一段时间，我一般看柱压，柱压差不多和进样前一样就可以了。

(xy200609)：
样品运行时间过长，40-60分钟梯度不必要，可在35分钟将甲醇比例尽快升上去，使其它峰尽快洗脱出来。
定量分析峰1和峰2，可以用外标法或内标法（如能找到合适内标物），当然最好扫描一下，尽可能用它们最大吸收波长。
不知图谱中其它峰是溶剂系统峰或是杂质峰，若是溶剂系统峰则还可加大进样量，使分析峰提高（当然必须在线性范围内）以减小分析误差。如果是杂质峰就没必要了。

(ygx)；
1.分析运行时间较长：提高5~10，40~60分钟时间段的甲醇比例，当然也可以适当提高柱温。
2.基线的漂移，似乎在梯度中都存在，不易消除，但是可以利用工作站或仪器的背景扣除功能来改善图谱情况。
3.你是不是象前面几位所讲，可以在梯度结束时加一个恢复初始值设置，以便仪器稳定。
4.从图谱看，完全可以对峰1、2进行定量。不过，图谱中杂质峰较多，可以采用外标法或标准曲线法进行定量。

tonghuahuaxue：
1.起始流动相中甲醇比例提高一些，如10%。在30分钟处就改甲醇比例为40%，缩短出峰时间。同时，在甲醇最高比例下多走一些时间，以确认峰已出完。
2.作梯度有一个麻烦事，就是为保证下一次进样的重现性需平衡较长的时间。所以做梯度多在研发而少在成品检测（可能是寡闻）
3.图的细节看不清，是基线高还是样品浓度较低，看起来一堆小峰，需不需要改一下波长

jennysing：
1、分析周期较长，峰型欠佳，杂质峰较多
2、可能为初始比例平衡时间不够，建议梯度程序增加回到原比例的步骤。
也可能是杂质的影响，建议改进前处理方法。根据检测波长，排除流动相梯度变化造成的基线波动。
3、可加入三乙胺改善峰型。40min后增加甲醇比例缩短分析时间

wwl9711：
1.初始流动相的有机相可以稍微增大一点点
2.40~60min之间的流动相变化太慢，可以在40~50min将有机相的比例调节到稍微比40%大一点点。
3.50~60min之间可以将流动相调回到初始比例，这样进下一针不至于因为流动相的变化太大而导致仪器难平衡。最好是在梯度里加入一个后运行时间，就是用初始的流动相比例平衡几分钟效果会更佳
4.可以稍微升高一点柱温30~40度的柱子温度可能较合适！

hmzhou83：
5－15min梯度可以加快一点，似乎没有必要需要10min

40-60min时间太长，同样可以缩短