HPLC在线紫外光谱检测和离线TLC确证猪肾中镇定药和咔唑心安残留Tranquillizers and Carazolol – An HPLC Method with On-line UN Spectrum Identification and Off-line TLC Confimation for Residues in Pig Kidneys
安全操作与注意事项
有机溶剂:所有的有机溶剂都必须作为潜在的有害物对待,使用时必须在通风橱中进行。
稀释浓硫酸时要小心。
引言
镇定药和β-受体阻滞药咔唑心安被用于解决许多兽医实践中遇到的紧张情况。对残留量特别有影响的是在转移至屠宰场时防止猪死亡和猪肉变质时使用,从用药到屠宰一般不超过几个小时,这就可能导致在可食部分有高的残留量。
1. 主题内容
在整个EEC,许多镇定药和咔唑心安会在不同情况下使用。为了保证农场主在未经许可的情况下不用这些药物或者限制使用于产肉动物,可在屠宰场抽取肾脏样品,对此类化合物进行检测。不论何时有阳性检测结果,都必须进行确证。(见方法Cy 4.5和Cy 4.6)本方法按照残留指令(86/469/EEC)执行,并在荷兰的RIKILT-DLO进行。
2. 应用范围
本方法用于猪肾中6种镇定药和咔唑心安残留量的定量和确证。镇定药的检测限量为50μg/kg。氮哌酮形成的主要代谢物是氮哌醇,这两种化合物同时作为残留物。
3. 参考资料
委员会决议,93/256/EEC,规定的具有激素或甲状腺作用的物质的残留量的检测方法。〔OJ. No L. 118, 14.4.93, pp64-74〕
2052/VI/84 file 6.11 Ⅱ-4,科学兽医委员会,工作组-“残留量参考方法”,制订的残留量检测参考方法的一般规则。
ISO标准78/2-1982的第二部分: 化学分析标准
ISO标准5725 (1986)
Van Ginkel, L.A., Schwillens, P.L.W.J. and Olling, M., (1989),
液相色谱法在线紫外检测和离线薄层色谱法确证猪肾中的镇定药和咔唑心安残留量。Anal. chim. Acta. 225, 137-146
Haagsma, N., Bathelt, E.R. and Engelsma, J.W. (1988), 薄层色谱法检测猪肉组织中的镇定药氮哌酮、丙酰丙嗪和咔唑心安。J. Chrom. 436, 73-79。
4. 定义
镇定药或咔唑心安含量表示通过所述方法测得的肾中镇定药或咔唑心安的含量,以μg镇定药或咔唑心安/kg被测样品表示。
5. 原理
本方法包括4个步骤
- 用乙醚提取碱性肾脏样品
- 用硅基二醇柱净化
- 用HPLC二极管阵列检测器分析和分级洗脱
- 对HPLC分离物用TLC进行镇定药和咔唑心安的鉴别
6. 材料
6.1 化学试剂
注:除另有说明,化学试剂均为分析纯并来自Merck, 通过其他渠道得到的相似品质的试剂也可以使用。
6.1.1 乙酸乙酯
6.1.2 乙醇
6.1.3 氯仿
6.1.4 己烷
6.1.5 乙腈,HPLC级
6.1.6 氢氧化钠
6.1.7 乙醚
6.1.8 无水硫酸钠
6.1.9 低沸点石油醚,沸点40-60℃
6.1.10 浓硫酸
6.1.11 乙酸铵
6.1.12 丙酮
6.1.13 二氯甲烷
6.1.14 氨水
6.1.15 硝酸铋(Ⅲ价)
6.1.16 冰乙酸
6.1.17 碘化钾
6.1.18 香草醛
6.1.19 85%磷酸
6.2 溶液
6.2.1 乙腈:水(80:20 V/V)
6.2.2 乙腈:水(60:40 V/V)
6.2.3 乙腈:水(60:40 V/V),含有0.1mol/L乙酸铵
6.2.4 乙腈:水:1mol/L乙酸铵(44.5:54.5:1,V/V/V)
6.2.5 TLC试剂
6.2.5.1 流动相Ⅰ;丙酮:二氯甲烷:25%氨水(40:60:1,V/V/V)
6.2.5.2 流动相Ⅱ;丙酮:25%氨水(100:0.1,V/V)
6.2.5.3 流动相Ⅲ;丙酮
6.2.6 TLC显色剂
6.2.6.1 Dragendorff试剂; 0.8g 硝酸铋(Ⅲ价)溶于10mL冰乙酸和40mL蒸馏水中,8g碘化钾溶于20mL蒸馏水中,将两种溶液混合后储于暗处。配制工作试剂时将6mL上述溶液与12mL冰乙酸、100mL乙醇(96%,V/V)和100mL乙醚混合,临用前现配。
6.2.6.2 香草醛-磷酸试剂;将3g香草醛溶于100mL乙醇中,然后边搅拌边加入75mL 85%磷酸、50mL蒸馏水和50mL乙醚。
6.2.6.3 硫酸试剂:加20mL浓硫酸于100mL乙醇中,冷却后再加20mL乙醚。
6.3 标准物质;氮哌酮和氟哌啶醇(Janssen Pharmaceutica) ;乙酰丙嗪(Clin Midy) ;氯丙嗪() ;丙酰丙嗪和甲苯噻嗪(Bayer)。
6.3.1 级分Ⅰ是浓度为2μg/L的氮哌酮和氮哌醇氯仿溶液。
6.3.2 级分Ⅱ是浓度为1μg/L的咔唑心安、氟哌啶醇和甲苯噻嗪氯仿溶液。
6.3.3 级分Ⅲ是浓度为1μg/L的乙酰丙嗪、丙酰丙嗪和氯丙嗪氯仿溶液。