HPLC法分析猪肾中磺胺二甲嘧啶(EEC,确证法 )HPLC法分析猪肾中磺胺二甲嘧啶(EEC,确证法 )
Analisis of Sulphadimidine in Porcine by HPLC
(EEC,Cy 3.3 Confirming Method)
引言
磺胺二甲嘧啶(sulphamethazine)是一种广泛使用的预防性抗微生物药,并做为猪肉生产的生长促进剂。
为了最大限度减少人们饮食中药物残留的危害,制定了停药周期。如果不执行该停药周期可能造成高水平残留。对取自屠宰场的组织进行残留监控,并按照残留指令(86/469/EEC)执行。在英国监控计划中选择肾作为分析组织。
样品最初以TLC和ELISA方法筛选,英国CVL实验室用本HPLC方法和GC/MS方法确证阳性结果。
1. 主题内容:
本分析方法描述了测定猪肾中磺胺二甲嘧啶的总量的方法。
2. 应用范围
该方法适用于猪肾的检测,对磺胺二甲嘧啶 的最小检出限是10ug/kg。
3. 参考文献 略
4. 定义:
磺胺二甲嘧啶含量是指按该方法测得猪肾中磺胺二甲嘧啶的残留量,表示为μg/kg。
5. 方法提要
用酸化的乙酸乙酯进行提取,合并的提取液被转至固相萃取柱(Bord-Elut amino(NH2)and cation exchange(SCX)用氨化的甲醇洗脱磺胺二甲嘧啶并用反相
液相色谱UV检测进行定量。
6. 材料
6.1 化学试剂
6.1.1 丙酮 HPLC级(BDH)
6.1.2 乙酸乙酯 HPLC级(FSA)
6.1.3 正已烷 HPLC级(FSA)
6.1.4 甲醇 HPLC级(BDH)
6.1.5 氨溶液 比重0.88 约35%(FSA)
6.1.6 乙腈 HPLC级(BDH)
6.1.7 冰醋酸 AR级(BDH)0.1 mol/L取0.57mL,用去离子水稀释至100mL。
6.1.8 醋酸铵溶液 AR级(BDH),0.0124 mol/L (取770mg, 用去离子水稀释至1L)。
6.1.9 磺胺二甲嘧啶结晶( Chemical Ltd.)
6.1.10 固体二氧化碳 Cardice (dry ice)(Distillers Co)
6.1.11 溶液
6.1.11.1 5%醋酸/乙酸乙酯:5 mL醋酸用乙酸乙酯稀释至100 mL。
6.1.11.2 25%氨/甲醇溶液,25 mL氨溶液用甲醇稀释至100mL。
6.1.12 流动相,0.01 mol/L 醋酸铵/甲醇/乙腈,85/7.5/7.5;V/V/V。
6.1.13 磺胺二甲嘧啶标准品6.1.13.1标准贮备液:1mg/mL磺胺二甲嘧啶溶于丙酮,贮存在-20℃,可保存4个月。
6.1.13.2 中介标准溶液;用丙酮稀释标准贮备液至100mL。制备100μg/ mL标准液。 用丙酮将100μg/mL标准液稀释成10μg/mL标准液,保存期1个月。
6.1.13.3 工作标准溶液:在使用当天,吸取10μg/mL浓度标准 12.5,25,50,75μL,挥发后,重新用500 μL流动相溶解,用于HPLC测定。(即:20 μL 进样量,分别含有5,10,20,30ng磺胺二甲嘧啶)。