图谱来找茬(第四季)◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆◆
请您来解析:
1.产生钝峰的原因有哪些?
2.怎样避免钝峰,有何措施?
3.图中除了钝峰,还有随着保留时间的延长,基线上飘。有什么办法可以减少漂移?〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓〓图谱如下:上图为钝峰图谱,下图为正常状态下的图谱,条件一样【梯度洗脱,甲醇:酸水(乙酸),298NM,ODS柱】
◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇
【附录】凡参与活动者,必有重奖
活动截止:2008年12月31日◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇◇
1.造成漂移的原因是电源电压不稳;温度及流动相流速的缓慢变化;固定相从柱中冲刷下来;更换的新溶剂在柱中尚未达到平衡等
通过加电源稳压器和接地措施、温度精确控制、恒压恒流装置来改善
2.如果条件没变化,最大的可能就是柱效不行了。
可以从图谱看出的是,峰高相差比较大,峰宽明显增加,保留时间没有明显变化。那么就是柱子的问题了。至于基线上漂的问题,我猜测是运行时间太长,柱子需要重新清洗,或者还是色谱柱使用时间太长了。
3.柱效下降往往导致保留时间的改变和峰形的改变
图中虽然峰宽增大,但是保留时间和峰形仍旧很好
推测可能是紫外检测器的扫描速率设定的过低,远大于半峰宽导致钝峰
基线漂移可以适当增加狭缝宽度
4.我觉得从两方面考,一是气体流量的稳定性,二是柱子污染或者是柱效下降。
5.肯定跟柱子是没有多大关系的,因为保留时间几乎是完全一致的。
现在需考虑的问题可能是检测器的问题,比如紫外灯的能量,波长的准确度与精密度需坐下验证。
6.温度是否稳定,有可能是灯的能量问题。
7.一定是紫外扫描频率被认为改过,上图的扫描频率明显要低,导致在同样时间内,采集到的数据不足,形成钝缝,而且两张图的标尺明显不同,钝峰的浓度明显偏小,这也是造成钝峰的一方面原因.
8.从图谱上看,两幅图中的保留时间基本一致,但是峰高差别几乎1倍,第一图比第二图出峰宽。结合斑竹提供分析条件,认为
问题1. 柱效降低;检测器的灵敏度小;流动相的pH值有较小的差异;
问题2. 更换新柱或老柱降低进样量;提高检测器的灵敏度或采样频率;使每次更换流动相的pH值保持一致或组成差别小。
问题3. 通常在梯度洗脱中不易根除基线的漂移,但是可以通过稳定环境温度来减小漂移;通过检测器或色谱工作站的空白背景扣除功能,来减去或扣除空白流动相的背景值或色谱图,来减小基线漂移的影响。
9. 钝峰可能是色谱柱效不行,还有就是样品最后定容溶剂(上机)也有关系,漂移可能是因为走梯度没有完全平衡好.
10.解决上面图的问题,首先彻底清洗柱子,因为基线噪音大,出现顿峰这是常见原因;其次要保证流动相比例的稳定和柱温的稳定
11.1.紫外灯能量可能降低了。2.柱效下降。
12.偷偷看了一下两张谱图的时间,发觉出现钝峰的谱图时间是在10小时以后的,而且流动相是甲醇:乙酸,长时间进样会使柱子“劳损”,柱效降低,所以会出现钝峰。
个人认为消除这种现象,可考虑在进样一段时间后,用较高浓度甲醇冲柱,之后再继续进样,也就是在序列里加进一针冲柱的。(不过要注意:冲柱的方法文件一定要保存到序列文件夹里,否则会出错停机!1200跟1100一样,很笨的)
13.出钝峰:指所出的样品峰不尖,所有峰或一部分峰的顶部呈不规则形状(平头或园形)。
出现的原因:
A.进样量太大使色谱柱或检测器形成饱和,减少进样量或降低样品浓度。
B.进样器是否存在漏液现象。
C.检查分析条件的设置是否正确。
D.尝试提高进样器、检测器的温度,改善峰的形状。
14.在气相的毛细管柱上,即使是柱子用了很长时间的(时间一年多,做样3000组,进样10000次以上的柱子,柱流失已经非常大),只要是不截柱子,保留时间变化是很小的。
但是在液相则不同,进样超过5000次以上,或者在样品比较脏的情况下,过一段时间后,保留时间就会有所变化。
因为我的结论也是样的钝锋的问题如果是液相出现的话,应该不是柱子的问题。
15.分析图谱发现峰的保留时间不变,但峰整体展宽.我认为原因应该是体系的死体积变大了.可能的影响区域是
1.柱子接头处,各管线接头处未完全接合,造成死体积过大.
2. 进样的六通损坏.
解决办法是:
1.采用合适的接头和正确的接法使系统死体积最小.解决基线漂移的办法是将液相条件稳定.如柱温,压力等.
16.我觉得是与纵坐标的电压显示量程范围有关,上图为显示到16,下图为35,上图相当于还有峰的上半部分被挡在了显示屏外。总的来说,是放大的比例不同,所以显示出的细微差别不同 ,上图就是纵向放大了之后,看到的峰下面部分。
18.条件没有改变,主要是色谱柱的柱效下降引起。
19.应该是柱效降低造成的。主要原因是流动相比例或PH不合适,或者水相比例过大且长时间冲洗造成的,用有机相较高的溶剂或纯有机相慢慢冲洗柱效可以恢复。
20.从图看:柱效下降很多,看来先要彻底的冲洗柱子.流动相里有乙酸,做样前多平衡柱子,另外加上柱温箱漂移会好些.
21.可能是柱效降低引起钝峰,可换根较好柱子。
基线漂移不是很大,应没多大问题,改善基线漂移方法:流动相尽量用色谱纯,水用超纯水(如Millipore); 如果可能,可适当提高检测器波长(必须对分析结果影响不大),基线漂移不所改善。
22.基线向上漂移通常是由于所用A与B溶剂的紫外吸收差异所致。反相梯度洗脱中,有机溶剂B浓度在分离期间是增加的,有机溶剂的紫外吸收总是大于水,so,采用紫外检测器时,这种漂移尤为普遍。与吸收度相关的飘移可通过“吸收匹配”来消除(即在A溶剂中加入uv吸收化合物,以增加A溶剂的吸收,使与B溶剂相等)
23.可能是柱子或流动相的问题,更换一下试试
24.我觉得应该是检测器的问题。
溶剂条件不变,波形不应该变化
峰的保留时间基本不变
所以可能处在检测器上。
25.如果仅是自外检测器的扫描速率设定过低,出峰时图谱不平滑,当不至于导致峰宽如图中这样增大。考虑到其保留时间和峰形仍旧完好,还是觉得柱效下降的可能性多一点.