主题：【第二届原创大赛】新手入门-色谱样品的引入5：液体样品（如何能保证进样的重复性必看）

液体微量注射器进样，可能存在两方面的问题。

1、所取样品的代表性问题。
注射器内部容易积存样品，取样到注射器内的样品，是否能够代表实际样品？

2、柱内样品的代表性问题。
样品在汽化室是否存在针头效应和分流歧视，能否正确代表实际样品？

只有解决这两个问题，才能解决液体样品的正确进样。

首先谈谈第一个问题。如何取得合适的样品?在我看来，可以对进样取样过程进行分解来解决，这主要分为以下几步。
1、外部洗针。
一个未知样品，要首先用注射器进行洗针。习惯上常量样品吸取足量样品并排放到样品瓶外3次；微量样品6次。是不是必须这么多次？看情况。一直用来分析含量稳定同一样品的注射器，甚至可以不外洗。但不清楚样品和注射器情况的时候，这样比较稳妥。
2、内部洗针。
用注射器抽取一定样品，并把这些样品推回样品瓶。内洗次数习惯上与外洗次数相同。同样，这个没有确切规定，我的习惯是洗更多一些次数。
3、取样品。
用注射器抽取一定样品。这里我们要注意：无论外洗、内洗，都应该采用慢拉快推的办法，只有这样才有有效吸取样品，避免样品在针头内产生的负压下汽化形成气泡，避免气泡的问题就不多说了。外洗的针杆行程应该是最长的，内洗次之，取样更次之。但取样的行程，应该超过实际样品进样量。由此我个人认为，最终取样量不应该超过针杆行程的一半。也就是说，10ul的注射器，最多用来进5ul样品，不能更多。
4、定容。
定容似乎很简单，就是把样品量定容到需要的量。但我们说，定容应该针尖向上。同时，定容的时候，是否需要用一片滤纸挡住针头？是否定容后应该用滤纸擦拭一下针头？这个问题留下来，希望大家能回答一下。
5、进样。
把定好容的样品，进入色谱仪。似乎这一步很简单，真的简单么？我们来看看。
第一个问题：进样的时候，手指是否应该停留在注射器针杆上方？回答是不能。如果手指在针杆上方，进样的时候，很容易因为紧张而在完全插入前就碰到针杆，造成体积不准确。
第二个问题：如果柱前压高，不顶住针杆，针杆在高柱前压下飞出来怎么办？回答是用手指轻轻顶住针杆侧面。对，用拇指和中指拿住注射器，用食指轻轻顶住针杆侧面，而不是上面。
第三个问题：如果插入的时候，不幸顶到了硬东西，进不去了怎么办？回答是轻轻下压的同时拧动注射器最大180度，如果能通过，则正常进样；通不过，拔出注射器重新取样。这是因为注射器通常是坡口，拧180度，轻微的偏离可以解决。
第四个问题：推针杆应该用力快速推下么？回答是不要过于用力。用另一只手的手指，或者顶住针杆侧面的食指，大小适中的快速拍下去，对，轻轻的拍下去，能够感受到针杆打在底上，但又不会造成针杆弯曲就是最合适的力气。注意：拍下去之后，手指不要离开，要一直按住针杆，直到拔出。否则高的柱前压可能造成针杆飞出。
第五个问题：还有问题？？？？是的，第五个问题是拍下后是否应该立刻拔出注射器。回答是不能。应该停留2-3s后快速拔出注射器。快速拔出在某些时候是有利的，但更多时候停留2s才是更稳定的方法。

经常有人说：内标法对进样量不在乎，为什么我用内标法进样，还是重复性很差？我可以肯定的告诉你，是你上面这些步骤，做的不到位。如果做到位，那么一切就会不同了。

楼主讲话，简而又简，做起来可不是很容易的，但只要去做，一切都会变得容易！新手学习中。

这个帖子和皮皮鱼老师一楼的链接一起看，会对进样的各种情况有全面的认识，可以尽最大可能保证你进样的重现性。需要细心看，仔细想。非常有实用的价值

我觉得有必要用滤纸挡一下，
定容后可以用滤纸轻触针头。

呵呵，谢谢楼主
绝大部分同意
某些地方持保留观点

定容后，用滤纸吸去进样针头外面的液体，再将针杆回抽至能刚刚看到气泡为止，然后快速进样，快速出针，这样有利于样品在汽化室集中瞬间汽化，可将峰型拖尾现象减至最小。

学习了，很好的资料！

一楼的那个参考帖子好像是我发的！谢谢皮老师！写的不错，要是再加点实际例子就更好了！

原文由 lpr20 发表:
一楼的那个参考帖子好像是我发的！谢谢皮老师！写的不错，要是再加点实际例子就更好了！

你讲解的也很好，两位可以继续讨论下去

很有收获，我们很多分析人员在注样时候存在楼主所说的错误，习惯好难改。。