反相色谱用的填料常是以硅胶为基质,表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相。
反相色谱所使用的流动相极性较强,通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。
样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组份最先被冲洗出,而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留。
常用的反相填料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H5(Phenyl)等。
在使用反相柱时,可适当增加甲醇或乙腈的含量,改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间。
如果在C18柱上不能保留,流动相中水的比例已经非常高的情况下,最好换成C8等含碳低的反相柱。