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主题：【第二届原创作品大赛】紫外分光光度法测定广金钱草中总黄酮含量

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土老冒豆豆

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发表于：2010/01/14 11:09:09 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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紫外分光光度法测定广金钱草中总黄酮含量
摘要：目的建立广金钱草中总黄酮含量的测定方法。方法以硝酸铝、亚硝酸钠及氢氧化钠为显色剂，以芦丁为对照品，采用紫外分光光度法测定。结果芦丁在4.4μg/ ml～53.1μg/ ml范围内呈良好的线性关系，r =0．999 9（n=7)，平均回收率为100.2％，RSD为1．5％。结论本法简便易行，有助于广金钱草药材的质量控制。
关键词广金钱草；芦丁；总黄酮；分光光度法

Determination of Total Flavonoids in Desmodium Styracifolium by UV Spectrophotometry
LI Rui(Nanning Institute for Food and Drug Control, nanning 530001，China)
Abstract：AIM To establish the determination method for total flavonoid compounds in Desmodium styracifolium．METHODS With A1NO3一NaNO2一NaOH as chromogenic agent，rutin was used as reference sample by ultraviolet spectrophotometry．RESULTS The absorbability and concentration of rutin had good linear in the range of 4.4μg/ ml～53.1μg/ ml,r =0．999 9（n=7)．The average recovery rate was 100.2％ and RSD was 1.5％．CONCLUSION The method is reliable and can be helpful to efectively the quality control of Desmodium stymcifolium．
Keyword Desmodium styracifolium(Osbeck)Merr；；rutin；total ilavonoids；UV spectrophotometry

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2010/1/14 11:09:19 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

广金钱草（Desmodium styracifolium (Osbeck)Merr．）是豆科山蚂蝗属植物，是我国常用的传统中药，具有清热、利尿、排石的功能，用于泌尿系统感染、泌尿系统结石、胆石症、急性黄疸型肝炎等[1]，含黄酮类，生物碱类，皂苷类，酚类等成分。药理研究证明：广金钱草中的三萜皂苷类和黄酮苷类化合物有预防乙二醇和维生素D 造成的大鼠草酸钙尿路结石形成的效果,广金钱草总黄酮对心脑血管病理模型具有很好的改善作用。《中国药典》对其含量测定尚无收载，本研究采用紫外分光光度法对广金钱草中总黄酮的含量进行了测定，旨在为广金钱草药材及制剂的质量控制提供科学依据．
1仪器与试药
AA-200电子天平（美国丹法），DGB/20-002台式干燥箱（重庆试验设备厂），KQ-100E超声波清洗器（江苏昆山），UV-2501PC紫外可见分光光度计（日本岛津）。
广金钱草全草分别购于**、**、**，经**所鉴定为正品广金钱草,芦丁对照品购自中国药品生物制品检定所（批号0080-9705），试剂均为AR级。

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2010/1/14 11:09:50 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

2 方法与结果
2.1 对照品溶液的制备精密称取在120℃下干燥至恒重的芦丁标准品22.13mg，置于50mL容量瓶中，加入60%乙醇适量，置水浴上微热溶解，放冷，以60%乙醇稀释至刻度，摇匀。精密量取25ml，置50ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。
2.2 供试品溶液的制备精密称取广金钱草4g，加60%乙醇70ml回流3小时，放冷，滤过，残渣加60％乙醇20ml超声30分钟，滤过，合并滤液，置100ml量瓶中，滤渣用60％乙醇洗涤，洗液置同一量瓶中，用60％乙醇稀释至刻度，摇匀。精密量取25ml，置50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。
2.3 测定波长的选择精密量取对照品溶液3ml，置25ml量瓶中，加30％乙醇至6.0ml，加5%亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6分钟，再加10％硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟。加氢氧化钠试液10ml，再加30%乙醇至刻度，摇匀，放置15分钟，以相应试剂为空白，测定吸收光谱，在509nm处有最大吸收。
2.4 标准曲线的绘制精确量取对照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL分置于25mL容量瓶中，各加30％乙醇至6.0ml，按2.3项下，自“加5%亚硝酸钠溶液1ml”起依法操作，在509nm波长处测定吸光度，以浓度(C)为纵坐标，吸光度(A)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：C = 8.8471E-05 A -1.7453E-07 ,r =0．999 9(n=7)，结果表明，芦丁浓度在4.4μg/ ml～53.1μg/ ml范围内呈良好的线性关系。
2.5 精密度实验精密量取对照品溶液3ml，按2.3项下方法操作，于509nm波长处测定吸光度5次．结果显示平均吸光度为0．398，RSD为0．45％。

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2010/1/14 11:10:09 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

2.6 稳定性试验精密量取供试品溶液3ml，按2.3项下方法操作，于0、10、30、45、60、90min时测定吸光度．结果表明，芦丁与铝离子形成的红色络合物在45min内稳定，RSD为1．21％。
2.7 重现性试验精密称取药材样品4.0 g，共5份，按2.2项下方法制备供试品溶液，按2.3项下方法操作，于509nm波长处测定吸光度，按回归方程计算，测得其总黄酮含量为1.21%，RSD为0.9％。
2.8 加样回收率实验取已知总黄酮含量（1.21%）的样品各6份，每份精密称取2g，按2.2项下方法制备供试品溶液。精密量取供试品溶液3ml，置25mL容量瓶中，精密加入对照品溶液1.5mL，加30％乙醇至6.0ml，按2.3项下，自“加亚硝酸钠溶液1ml”起依法操作，按回归方程进行计算，结果见表1。

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2010/1/14 11:11:22 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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2010/1/14 11:14:32 地板管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

3 讨论
3.1 提取溶剂的考察比较了甲醇、三氯甲烷、60%乙醇[2]三种溶剂的提取效果，以60%乙醇回流提取时的总黄酮含量高于其他溶剂提取，故选用60%乙醇为提取溶剂。
3.2 提取方法的考察比较了超声、回流、索式提取三种方法，以回流3个小时后，超声0.5h提取所得总黄酮含量较高，故选用该法提取。
3.3 测定方法的选择以芦丁为对照品，以硝酸铝、亚硝酸钠及氢氧化钠为显色剂，利用紫外分光光度计对广金钱草中总黄酮的含量进行测定的方法，具有简便易行及结果稳定可靠等优点。故选用该法测定。

参考文献
[1]赵学敏.本草纲目拾遗.第2版,北京：人民卫生出版社，1983：86．
[2]杨美华、卢兖伟、匡岩巍等.高效液相色谱法测定广金钱草中vicenin-2的含量.药物分析杂志,2004,24（1）:95-97.

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2010/1/14 11:15:22 6楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

土豆厚颜发帖，还是发原创帖。
其实这篇文章还是有很多问题的，比如通过总黄酮测定来控制药材质量，虽然还很普遍，但已经逐渐被淘汰了，现在基本上都要选定某个特定、有效成分做为质量控制指标，而且也是多用液相方法测定。简单的用黄酮含量来标示某药材质量已经有点落伍了。
还有实验过程中其实可以多尝试下不同溶媒对有效成分的提取效果的，但是因为实际情况是实验室需要找一个既便宜污染又少的溶剂，那当然是首选乙醇了，总之问题很多了，土豆在此抛砖引玉，欢迎各位专家提出问题，不管好坏，起码也活跃了药检版块的气氛嘛，哈哈，土豆不惜甘当靶子。

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