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近期测外样发现丹参对色谱柱的柱效及柱温要求很高,现对实验中注意的问题做一下讨论:
1材料丹参药材(送检样);乙腈(色谱级),甲醇、磷酸(分析纯);丹参酮ⅡA对照品(购自中检院)。2 仪器与设备岛津液相LC-20AT配制UV/DAD检测器,安家Eclipse XDB C18色谱柱(250mm*4.6μm*5μm),超声波清洗器。3 实验方法3.1 色谱条件流动相(参照中国药典2020年第一部):乙腈-0.02%磷酸水为流动相,进行梯度洗脱;检测波长270nm;柱温:20 ℃;流速:1.0mL/min,进样量:10μL。3.2对照品溶液制备取丹参酮ⅡA对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1mL含20 μg的溶液,即得。色谱图如下:
图1丹参酮ⅡA标准品(Eclipse XDB C18 )
3.3 供试品溶液的制备 (参照中国药典2020年版第一部)供试品溶液的制备取本品粉末(过三号筛)约0.3 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50 mL,密塞,称定重量,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL,注入液相色谱仪,测定。以丹参酮ⅡA对照品为参照,以其相应的峰为S峰,计算隐丹参酮、丹参酮Ⅰ的相对保留时间。色谱图如下:
4 结果与讨论
液相色谱仪使用中关键因素是流动相和色谱柱,根据待测物质的化学性质,选择合适的色谱柱,但是测定丹参的过程中发现柱温对其影响也比较大,使得待测物质不能能够有效分离,从而不能准确定性定量。丹参药材注意的就是柱温一定要在20±2℃左右,进样才能达到有效分离。