主题：【原创】【极限体验】月旭XB-C18色谱柱对复方石韦胶囊中苦参碱含量检测

有段时间没有来了，月旭版越来越红火，客套话不说，直接上正文。

于2006年给一家药厂制定的改剂型类新药申报资料，我主要负责含量测定的标准制定，现在主要说的是色谱条件摸索的一些小结，说不上经验，因为时间较久，就没有色谱图，就看看文字，希望对大家有帮助。

复方石韦胶囊
[主要成份]：石韦、黄芪、苦参、扁蓄。
[功能主治]：清热燥湿，利尿通淋。用于小便不利，尿频，尿急，尿痛，下肢浮肿等症；也可用于急慢性肾小球肾炎，肾盂肾炎，膀胱炎，尿道炎，见有上述证状者。

检测成分：苦参碱
分析仪器：岛津高效液相色谱仪
                    紫外检测器
                    手动进样阀

一、检测波长确定：
      配置苦参碱的标准溶液，浓度为5.0μg/ml，于紫外分光光度计中进行波长扫描，确定最大吸收波长；
根据波长扫描结果和参照相关方法，确定检测波长为：220nm

二、色谱条件建立：
1、色谱柱：大连某家ODS  C18（250mm*4.6mm，5.0μm）
      流动相：甲醇：水：三乙胺（50：50：0.2）
      柱温：40℃
      流速：1.0ml/min
      检测波长：220nm
色谱图：
    S-001： 保留时间 11.000min        峰形较差，呈馒头样
    Y-001： 保留时间 11.005min        与目标峰的前一个杂质峰无法分开，更改色谱条件

2、色谱柱：大连某家ODS  C18（250mm*4.6mm，5.0μm）
      流动相：乙腈：磷酸水溶液（PH：2.0）：无水乙醇（80 ：10 ：8）
      柱温：40℃
      流速：1.0ml/min
      检测波长：220nm
色谱图：
    S-002： 保留时间 15.093min        峰形较差，保留时间较长
    Y-002： 保留时间 15.102min        与目标峰的前一个杂质峰无法分开，更改色谱条件

由于峰形较差，理论板数较低，更换色谱柱。（换下的色谱柱，用另一台LC进行冲洗）

3、色谱柱：上海某家 C18（250mm*4.6mm，5.0μm）
      流动相：乙腈：磷酸水溶液（PH：2.0）：无水乙醇（80 ：10 ：8）
      柱温：40℃
      流速：1.0ml/min
      检测波长：220nm
色谱图：
    S-003： 保留时间 19.537min        峰形较差，保留时间较长
    Y-003： 保留时间 19.601min        与目标峰的前一个杂质峰无法分开，更改色谱条件

由于峰形较差，理论板数较低，更换色谱柱。（换下的色谱柱，用另一台LC进行冲洗）

4、色谱柱：月旭XB C18（250mm*4.6mm，5.0μm）
      流动相：乙腈：磷酸水溶液（PH：2.0）：无水乙醇（80 ：10 ：8）
      柱温：40℃
      流速：1.0ml/min
      检测波长：220nm
色谱图：
    S-004： 保留时间 16.024min        峰形较好，保留时间较长
    Y-004： 保留时间 16.099min        与目标峰的前一个杂质峰无法分开，更改色谱条件

5、色谱柱：月旭XB C18（250mm*4.6mm，5.0μm）
      流动相：甲醇：水：三乙胺（50：50：0.2）
      柱温：40℃
      流速：1.0ml/min
      检测波长：220nm
色谱图：
    S-005： 保留时间 11.398min        峰形好
    Y-005： 保留时间 11.297min        与目标峰的前一个杂质峰无法分开，更改色谱条件

6、色谱柱：月旭XB C18（250mm*4.6mm，5.0μm）
      流动相：甲醇：水：三乙胺（50：70：0.2）
      柱温：40℃
      流速：1.0ml/min
      检测波长：220nm
色谱图：
    S-006： 保留时间 13.110min        峰形好
    Y-006： 保留时间 13.082min        与目标峰的前一个杂质峰无法分开，更改色谱条件

在以上实验中，确定了色谱柱和检测波长，柱温，流速，苦参碱的出峰时间和顺序，为了节约时间，在以下的色谱条件选择中考察是否能样品中杂质峰分离

7、流动相：甲醇：水：三乙胺（50：71：0.2）
色谱图：
        Y-007： 保留时间 13.570min        与目标峰的前一个杂质峰无法分开，更改色谱条件

8、流动相：甲醇：水：三乙胺（50：75：0.2）
色谱图：
        Y-008： 保留时间 13.390min        与目标峰的前一个杂质峰无法分开，更改色谱条件

9、流动相：甲醇：水：三乙胺（80：75：0.2）
色谱图：
        Y-008： 保留时间 8.800min        与目标峰的前一个杂质峰无法分开，更改色谱条件

10、流动相：甲醇：水：三乙胺（80：100：0.2）
色谱图：
        Y-008： 保留时间 25.950min        与目标峰的前一个杂质峰完全重合，更改色谱条件

11、流动相：甲醇：水：三乙胺（60：40：0.2）
色谱图：
        Y-009： 保留时间 8.920min        与目标峰分开，分离度1.95

复方石韦胶囊中苦参碱含量检测色谱条件：

分析仪器：高效液相色谱仪
                    紫外检测器
色谱条件：
    色谱柱：月旭XB C18（250mm*4.6mm，5.0μm）
      流动相：甲醇：水：三乙胺（60：40：0.2）
      柱温：40℃
      流速：1.0ml/min
      检测波长：220nm

小结：
1、苦参碱为碱性物质，故在流动相中加入三乙胺作为碱性调节剂，但是该种物质和水溶解度较小，在配置流动相时要尽量的混匀；
2、在该样品中，由于苦参碱和前一个杂峰对流动相的敏感度想接近，在做流动相调节时，相互成分之间的比例作较大调整，如果调整较小，两个峰同时向前或向后移动，故没有明显的分离效果。

因为没有色谱图，没有办法做很直观的比较，请大家耐心的看，多提宝贵意见。