>> 流动相的作用 | ||||
流动相具有运载样品分子的作用。 | ||||
流动相还具有选择性分离的作用。 | ||||
当固定相一定时,流动相的种类、配比和流动速度都严重影响分离效果。 | ||||
>> 流动相的种类 | ||||
液相色谱所用流动相根据分析目的可分为单一或混合流动相。 | ||||
混合流动相还可分为比例固定和比例可变流动相。 | ||||
梯度洗脱就是使用比例可变流动相。 | ||||
>> 流动相使用的注意事项 | ||||
流动相的级别 | ||||
流动相的处理 | ||||
——过滤和脱气 | ||||
流动相的置换 | ||||
>> 流动相的级别-水 | ||||
水是最常见的极性溶剂 | ||||
HPLC用水的要求:纯化水(重蒸水) | ||||
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>> 流动相的级别-有机试剂 | ||||
采用“HPLC”级溶剂 | ||||
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>> 分析纯级和HPLC级溶剂的吸光度比较图 | ||||
>> 流动相的处理——过滤 | ||||
•使用0.45um或更小孔径滤膜过滤,注意滤膜的种类。 | ||||
•目的:除去溶剂中的微小颗粒,避免堵塞管路和色谱柱,尤其是使用无机盐配制的缓冲液时。 | ||||
>> 滤膜类型 | ||||
1、聚四氟乙烯滤膜:适用于所有溶剂,酸和盐。 2、醋酸纤维滤膜:不适用于有机溶剂,特别适用于水基溶剂。 3、尼龙66滤膜:适用于绝大多数有机溶剂和水溶液,可以用于强酸,不适用于二甲基甲酰胺。 4、再生纤维素滤膜:蛋白吸收低,同样适用于水溶性样品和有机溶剂。 | ||||
>> 过滤的注意事项 | ||||
•不同的试剂分别过滤,过滤后再混合。 •注意滤膜的选择,不要混用。 •要现用现处理,尤其是水和缓冲液。 •要注意操作过程中的防尘。 •试样也必须过滤,可用一次性针头式过滤器。 | ||||
>> 流动相的处理——脱气 | ||||
•目的:除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡。 •使用梯度洗脱时要有在线脱气装置。 •气泡对测定的影响: 1、造成压力波动,影响保留时间。 2、色谱柱中的气泡会造成峰变形。 3、检测池中的气泡会造成基线波动。 | ||||
>> 脱气的方法 | ||||
•1、超声波振荡脱气 •2、氦气置换清除法 •3、使用树脂膜的减压脱气法 •应根据实际的使用情况选择合适的脱气方法。单一流动相或配合好的混合流动相可以采用超声振荡脱气,梯度洗脱最好使用在线减压脱气。 | ||||
>> 氦气置换清除法 | ||||
>> 使用树脂膜的减压脱气法 | ||||
>> 流动相的置换 | ||||
•极性相似的试剂可以直接置换。 •极性不同的试剂,应用中间试剂作过渡。 例如:甲醇置换为正己烷时,可以考虑选择异丙醇作为中间试剂。 •缓冲液的置换应先用水冲洗,再用有机试剂置换水。直接使用有机试剂会造成盐的结晶,堵塞管路和色谱柱。 |
转载自岛津官网