主题：【第三届原创参赛】新柱柱效低原因调查分析

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发表于：2010/11/01 20:35:14 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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最近刚买了一根ODS 色谱柱，拿到新柱先看看产品说明书中有一张谱图其中有个组份是萘，用80%的甲醇水溶液作流动相，柱效为6万多。按照说明书我也准备了萘作标准物质，准备测一下新柱子的柱效，用纯甲醇作流动相（测试中偷了个懒，我认为只有萘一个组份应该没问题的）开始测试。一测试问题就来了：理论塔板数1355 萘标准品中杂质未分离出来；峰形很钝还拖尾。谱图如下图：

开始怀疑是柱子有问题，不过这个厂家的柱子一直都挺好的，还是先不要下结论。把柱子卸下来装在另一台仪器上，流动相和仪器参数都一样，进相同的标准品，理论塔板数为9552，萘标准溶液中杂质分离出来。
谱图如下：

在另外一台仪器理论塔板数提高很多，说明色谱柱是没有问题的。仪器在换柱之前也没有出现异常问题。回想一下在用新柱子时，唯一动过的地方就是连接色谱柱的PEEK管有更好过，把两台仪器的PEEK管卸下来对比一下。问题出来了：原来更换的PEEK管内径比原来的大很多，对换过来再测试一下.理论塔板数为10307，萘标准品中杂质能完全分离出来,峰形很尖锐。

如下图：

分析影响理论塔板数的因素：
1、理论塔板数（theoretical plate number,N）---用于定量表示色谱柱的分离效率（简称柱效）。N取决于固定相的种类、性质（粒度、粒径分布等）、填充状况、柱长、流动相的种类和流速及测定柱效所用物质的性质。
2、柱外效应也是影响柱效的重要因素之一。柱外效应：简单的说色谱峰在柱外死空间里的扩展效应。（样品在流动相里是有扩散性的，无论在色谱柱里还是在管路里都是一样）柱外效应除了由不好的进样技术引起外；主要是由从进样点到检测池之间除柱子以外的所有死体积所引起。死体积通常测试中是包括了柱外死体积，即色谱仪中的管路和连接头间的空间以及进样系统和检测器的空间，包括柱后死体积和柱前死体积：
A）柱后死体积如果太大就会造成已分离物的重新混合，使分离度降低峰形变差；
B）柱前死体积太大造成样品分散过大，其效果类似于增加了上样体积，影响色谱柱的分离效果。

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