主题：【原创】【极限体验】Ultimate XB C18柱，关键时刻，怎能没有？！（10月份）

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发表于：2011/10/09 21:09:21 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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【背景介绍】
做植物提取分离的，往往能用一些高雅的词汇来描述，比如：XX活性成分研究，或者XX活性追踪分离，更高级的，比如XX分子探针什么什么研究等等。说白了，还不是分化合物么？没有化合物，什么都是扯淡，什么都是纸上谈兵，什么都是虚无飘渺。目前，从大局来看，拿化合物最常用的手段是什么？毫无疑问是制备液相（Pre-PHPLC）。不要说硅胶凝胶大孔聚酰胺，也别跟我说什么小极性什么脂肪酸，这些都只是小打小闹，这一点，我相信我不会弄错。

制备液相的准备工作是什么？当然是用分析型液相摸索进行制备液相的条件。分析液相进一针也就十几二十分钟，制备液相，往往进一针，轻则半小时一小时，重则两三个小时，更甚者，五六个七八个小时，不可能直接用制备柱摸索液相条件的。这就涉及到另一个问题，那就是：用什么样的分析型色谱柱。对于我的实验而言，分析柱承担的最重要的任务就是定性分析样品的成分，说白了，就是知道大概有几个峰。分析柱得出的实验结果，直接决定制备液相采取的实验方案。

【仪器试剂】
水：重蒸水
甲醇：色谱纯，天津大茂
乙酸：分析纯，天津大茂
HPLC：Waters 高效液相
Waters 996 DAD检测器
Waters Model 600 controller[url=https://insevent.instrument.com.cn/t/5p]液相色谱

【色谱条件】
色谱柱：Ultimate XB-C18柱（5μm, 4.6x250mm）、某品牌色谱柱
流动相：XX%甲醇/水（V：V），水含0.01%乙酸
流速：1.0ml/min
柱温：常温（约25度）；
检测波长：全波长检测；
进样量：5微升；

【样品简介】
样品来源于某植物，经过复杂的前处理过程得来（做提取分离的，累啊），总量约2g。
此样品在硅胶板上呈单一斑点，凝胶的单一流分等，言外之意：只能用制备液相分了。
后续从此样品中分离得到多个“珍贵化合物”，故包括流动相比例等信息在内，保密。

【名词介绍】
细分：俗语，此处特指经过制备液相后，拿到N个化合物（N大于等于1）；
粗分：俗语，此处特指经过制备液相后，拿到M个组分（M大于等于2），再进行细分；

【实验过程】
某日用某品牌色谱柱分析，得到的峰形如下图。粗略的看了一下，大概是5个峰左右。5个峰，直接用制备液相进行细分就可以完成工作了。后来想了想，还是保险一点好，毕竟都是一个一个的“包子”峰。后来换了流动相又陆续做了几针，效果还不如这个图，没办法，换柱子吧。

好了，到了呼喊标题的时候了：关键时刻，怎能没有Ultimate XB C18？！！
说实话，虽然我对样品很了解，但我对Ultimate XB C18并不了解，第一针的出峰时间在8min之内，有点太短。
相比第一张色谱图的5个峰，这次能看到八九个峰了。。

随后，调整流动相比例，又分析了一针，这次时间控制在17min之内，比较不错。
相比上图，明显地看到峰里有峰，远不止八九个峰了。

现在已经了解到，这个样品的组成，至少有十多个成分，这就不适合用制备液相直接进行细分了。因为在样品组成简单的时候，要调整流动相将每个峰分开，是很简单的事；在样品组成复杂的情况下，要将每个峰都分开，是很复杂的事，往往是四五个小时以上（纯属经验），要是采用这样的方案，一个样品连续制备一个月也未必能做完。

【后续实验】
所以，最后选择的实验方案是用制备液相进行“粗分”，然后再“细分”。事实上，后续的实验中，我将此样品“粗分”成8个流分，这8个流分，有两个制备完以后就是单体化合物。然后我再对另外的6个流分进行了“细分”，细分的过程中，每个样品在制备的时候，基本都“拖”到了5个小时才出峰。整个样品，得到的单体化合物在10个以上，并且含有非常重要的“珍贵化合物”。

【小结与讨论】
请参考标题及贴子中红色字体部分。

【画蛇添足】
秀一秀部分单体化合物。
注：有些显示有杂质，但不影响我的实验结果。