主题：【原创】“色”路蹒跚，涓流成溪，雷贝拉唑钠肠溶片有关物质之杂质谱汇总分析

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发表于：2013/06/29 21:29:18 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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此篇文章，相对于杂质谱分析是个综述性质的。

项目：有关物质试验条件及操作

检查方法：HPLC法

试验条件：

色谱柱（柱长：250mm，内径：4.6mm，填料：C₁₈，填料粒径：5μm）

月旭色谱柱：SN:W10212097；PN：weL518425。

UV检测器（检测波长：290nm）

柱温：30℃

流动相：0.05mol/L磷酸盐溶液(用0.05mol/L磷酸二氢钾溶液调节0.05mol/L磷酸氢二钠溶液pH值至7.0)-甲醇(40:60)

流速：1.0ml/min

运行时间：约30min

具体试验操作：取含量测定项下的细粉适量(约相当于雷贝拉唑钠50mg)，精密称定，置50ml量瓶中，加0.05mol/L氢氧化钠溶液20ml，超声溶解，放冷至室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀，在3000rpm下离心10分钟，取上清液作为供试品溶液。精密量取供试品溶液1ml，用0.05mol/L氢氧化钠溶液-甲醇(2:3)稀释至100ml，作为对照溶液。精密量取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的20%～25%；再精密量取供试品溶液与对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分色谱峰保留时间的2倍。对照溶液中的主峰面积As、供试品溶液中各杂质的峰面积Ai均通过自动积分测定，以各杂质峰面积与对照溶液主峰面积的比值计算得出各杂质的含量，总杂为各杂质和。

计算公式：

各杂质的量（%）=Ai/As

杂质总量（%）=∑i

1.专属性试验，主要是分析色谱条件能否满足分离出更多的杂质，以及色谱峰参数符合药典要求。有已知杂质更好，没有，就只能进行破坏产生杂质，分析汇总结果，列出杂质谱。

一般做法就是以相对保留时间列表统计，然后再进行物理平衡，这样能从侧面验证，杂质检出的最大限量。

举例：

物料平衡，主要以响应值来进行平衡，如：

杂质谱做出来了就要和原研上市品比较，主要考察杂质的个数以及对应情况，如：

最好，直观比较，用工作站把各色谱峰进行比较，如：

其他项目，我在这个月的原创里面谈了很多，如检出限定量限、精密度、稳定性等，就不谈了。

2.稳定性考察的杂质谱比较，主要考察新增杂质个数及含量变化，若样品不稳定，也同条件下进行上市品考察比较，如：

【检查】有关物质 本品有关物质检查采用高效液相色谱法，并对方法进行了方法学验证，验证试验结果均符合要求。本品流动相选择试验结果显示，以0.05mol/L磷酸盐溶液(用0.05mol/L磷酸二氢钾溶液调节0.05mol/L磷酸氢二钠溶液pH值至7.0)-甲醇 (40:60)为流动相能满足本品有关物质检查要求；根据本品专属性试验统计结果，将检测波长选择为290nm。

限度确定：经过加速试验和长期试验，本品在加速条件为温度为40±2℃、相对湿度为75±5%加速试验条件下，考察至2个月时，本品有关物质变化情况为单杂在0.7%～1.7%，总杂在0.9%～5.4%（总杂限度为3.5%）；温度为30±2℃、相对湿度为65±5%加速试验条件下，考察至6个月时，本品有关物质变化情况为单杂在0.7%～1.3%，总杂在0.9%～1.9%；长期试验条件下考察至18个月，本品有关物质变化情况为单杂在0.7%～0.9%，总杂在0.9%～1.3%。

再直观作图，杂质谱统计也要做就不累述了。作图：

这样作图就很直观了，审批的老师看起来也不吃力，就有好运哈。

说了半天，整张美图看看：

总结：

1.明确研究项目内容及要点，结合ICH以及相关国内的指导原则，规划试验项目及进展；

2.每个项目分解后总结，就如涓流成溪一样，说明您要表达的试验意图，最好表图结合直观表达；

3.开展一个项目，就如有关物质，要准备好至少两根同型号的色谱柱，还有其他主流品牌的，特殊色谱柱除外；这样有几大好处，如杂质谱好归属，项目不会中断，另外品牌的可以复核自己做的情况，因为药检所可能会用到不是您用到的品牌，这样自己有把握让药检所做合格；

4.另外，要考察不同品牌的液相对杂质谱的影响，建议不要用相对保留时间来定位杂质，有条件买到已知杂质，用已知杂质定位最好，有资料显示，岛津和沃特斯液相同样的色谱柱及同样的色谱条件，其相对保留时间相差很大，到时药检所符合就有很大很多的麻烦。

以上，是我试验总结和体会，希望朋友批评指正。