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主题：【第六届原创】HPLC法测定马兰头中β-胡萝卜素

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nphfm2009
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光谱发表于：2013/09/28 10:13:30 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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HPLC法测定马兰头中β-胡萝卜素



摘要：本文建立了一种新的HPLC法测定马兰头中β-胡萝卜素的方法。方法样品经石油醚-丙酮萃取， 氮吹挥发近干，甲醇定容，无水硫酸钠脱水后分离检测。色谱分离时采用C8 150mm×4.6mm柱, 甲醇为流动相, 450nm波长处检测。 该方法的工作曲线线性范围为（0.1～25）ug/mL, 相关系数r=0.99992,其检出限为0.03mg/kg。方法回收率为（98.8～99.6）%。该方法简单快速、满足检测的日常需求。

引言

β-胡萝卜素又称维生素A前体，是类异戊二烯化合物，分子式：C40H56。其结构式为；




入BHT抗氧化剂1g（或丁基羟基茴香醚BHA），色谱级三氯甲烷定容，封口膜-18度保存。

使用前用色谱纯甲醇将β-胡萝卜素标准储备液稀释配制成0 ug/mL、0.10 ug/mL、0.5 ug/mL、1.0 ug/mL、2.0 ug/mL、5.0ug/mL、10.0 ug/mL、25ug/mL于棕色容量瓶备用。

样品前处理

马兰头经适当剪碎后，放置在冷冻箱-18度下冷冻30min，然后取出用捣碎机捣碎, 装入棕色瓶待用。精密称取0.8000样品于研钵中, 加适量水润湿软化并研细, 加无水硫酸钠2g及5mgBHT（或丁基羟基茴香醚BHA）,每次用石油醚+丙酮（80+20）5mL多次研磨萃取, 直至提取液无为无色,合并提取液于烧杯中, 于避光通风橱中30度水浴氮吹近干。根据提取液色泽, 用色谱级甲醇定容至10.0mL～25.0mL，加入无水硫酸钠1g, 超声片刻, 振荡1min后冷冻离心（10000rpm, 5度）取上清液过0.22um滤膜于棕色样品瓶中备用待测。以上操作应避光。

结果与讨论

色谱条件的选择

流动相: β-胡萝卜素极性弱, 易被洗脱，该方法采用甲醇流动相， 避免使用毒性较大的乙腈， 通过调节流速和柱温优化色谱条件实现小流量、室温基线分离。

检测波长

β-胡萝卜素在以甲醇为流动相，450nm和477nm处有两个特征吸收峰， 450nm处峰高较477nm高，该方法采用光谱扫描（400nm～490nm），光谱图匹配辅助定性，450nm处定量。每次试验分别进行标品、样品光谱扫描，如果吸收峰偏移或两个的峰值比例失调及工作标准使用液响应降低等都应弃用。
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2013/9/28 10:31:55 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊


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2013/9/28 11:08:59 Last edit by nphfm2009
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2013/9/28 10:38:20 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
怎么图片无法上传
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土老冒豆豆
tulaomaodoudou
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2013/9/28 21:16:37 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
样品为什么要冷冻后才粉碎啊，是不是冻硬了比较好粉碎呢？
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nphfm2009
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2013/9/28 21:22:42 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
是的，冻硬了更好粉碎
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wangshirf
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2013/9/30 21:44:41 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
任何植物都有 胡萝卜素，！ 测定没有太大的意义、、
没啥 药效！！！！！！

不如测个活性成分，否则  不具有专属性！！！
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