主题：【第八届原创】高效液相色谱法快速检测徐长卿中丹皮酚

高效液相色谱法快速检测徐长卿中丹皮酚

        药材徐长卿，这个药名很像人名，属于萝藦科（这个叫法也很特别）植物徐长卿的干燥根和根茎。具有祛风、化湿、止痛、止痒等药物功效。可用于治疗风湿痹痛、胃胀疼痛、牙痛腰痛、跌打伤痛、风疹湿疹等病症，效果较好。
        下面我们重点介绍下高效液相色谱法检测徐长卿药材中丹皮酚含量及色谱条件的改变对色谱效果的影响。
实验部分
【原理】
        精密称取适量徐长卿样品（粉末）经甲醇溶解，超声提取后注入高效液相色谱系统，C18色谱柱分离，紫外检测器检测，外标法（保留时间定性，峰面积定量）计算，得出该样品中丹皮酚含量。
【仪器及试剂】
        仪器：高效液相色谱仪（紫外检测器+等度泵+柱温箱+在线脱气机等），超声波清洗仪，溶剂过滤器，电子天平（0.0001），药典筛（五号筛）等。
      试剂：甲醇（色谱纯）， 超纯水等。
【样品制备】
        对照品溶液制备：准确称取丹皮酚对照品2mg于100ml容量瓶中，加甲醇溶解、定容，制成20ug/ml丹皮酚对照品溶液，备用。
        供试品溶液制备：取徐长卿样品适量，充分粉碎后过药典筛五号筛，准确称取过筛粉末0.5g，置具塞锥形瓶中，精密加入50ml甲醇，称定重量并记录，超声处理30分钟，放冷，再次称定重量，用甲醇补足减少的重量，摇匀，0.45um微膜滤过。精密量取1ml续滤液于10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，待测。
【色谱条件】
检测器：紫外检测器
检测波长：274nm
色谱柱：Promosil C18 ( 250 mm X 4.6mm，5μm )
流动相：甲醇：水=45：55（V：V）
流速：1.0ml/min
柱温：30℃
进样量：10μl
【色谱图】
对照品溶液色谱图：

供试品溶液色谱图：


        这个检测效果还可以，样品中干扰物很少，分离度很好，准确度也很高，该方法适合该样品中丹皮酚含量检测。
这个检测效果还可以，但检测时间太长了点，太浪费时间。再三考虑后，决定改变下色谱条件，争取缩短些时间。
        首先换一根150mm长其它规格相同的色谱柱，其它色谱条件不变，看下色谱效果。
【色谱图】
对照品溶液色谱图：

供试品溶液色谱图：

        效果不错，达到了预期效果。
        如果实验室没有合适的色谱柱，那也没关系，我们可以通过改变流动相，也能取得很好的效果。下面我们把流动相改为甲醇：水=65：35（V：V），看下效果。
【色谱图】
对照品溶液色谱图：

供试品溶液色谱图：

        这个效果也不错吧，检测时间已经比较短了，分离度、色谱峰形也相当不错，这个方法也是相当理想的检测方法。
        当然我们还可以通过增加色谱泵流速，提高柱温箱温度等色谱条件来缩短检测时间，效果也都相当不错。在这需要注意的是，色谱泵流速一般情况下不要变，因为每一规格色谱柱的内径及填料颗粒等因素决定了只有一个流速最适合它。它在这个流速下色谱峰展宽、峰对称性等效果最好，而且使用寿命最长，因此能通过改变其它色谱条件达到目的的，尽量不改变该条件。
【结论】
1. 以上几种方法检测徐长卿药材中丹皮酚含量结果都较准确，效果都不错，都适合该项目检测。
2. 检测时间长的话可通过改变色谱柱长度，流动相中有机相含量，柱温箱温度，色谱泵流速等色谱条件缩短检测时间，但一定得注意样品中各成分的分离度，及检测结果的准确性。
3. 综合考虑，选择一款较短的色谱柱是比较理想的，它既能缩短检测时间，对色谱系统产生的压力小，色谱柱价格一般还较便宜。如果换用较短的色谱柱后检测时间还较长，再适当改变流动相，这样效果会更好。
4. 照抄一个方法是最简单的选择，一般都能顺利的完成实验，但实验效果不一定理想。如果这个检测项目批量比较大，参考方法检测的效果又一般，我们不防优化下色谱条件，争取达到更完美的结果。
5. 优化色谱条件时一定得考虑样品情况、实验室具体条件及检测结果准确性要求等，切不可盲目追求某一指标而影响其它效果。