1928年，德国药学家布赫勒首次从柳树叶中提取出水杨苷，水解后为水杨酸和葡萄糖。水杨酸是普遍存在于高等植物体的内源生长调节物质。有人认为它可能是一类新的植物激素影响植物体内许多生理过程。小麦收获前穗发芽是一个世界性的问题。在华北地区小麦收获前常遇到连续阴雨天气，小麦穗发芽不仅使小麦显著减产，而且使其加工、营养品质和种植价值均受到影响，造成严重的经济损失。从提取方式的角度，了解柳树叶中含有的物质对小麦籽粒发芽的影响。针对蒸馏水浸泡法、沸水煎煮法、乙醚萃取法、甲醇浸泡法四种提取方式进行了研究。结果表明四种提取方式的提取液不同程度的抑制小麦籽粒的发芽。其作用强度为；乙醚萃取液＞甲醇浸泡液＞沸水煎煮液＞蒸馏水浸泡液。
关键词 柳树叶，浸提方式，小麦发芽
1. 材料和方法
1.1 材料
柳树叶，偃师4110
1.2 提取方式
蒸馏水浸泡法：采集新鲜柳树叶，称量其鲜重，用烘箱烘干称量干物质重量计算出柳树叶的含水量，取一定量柳树叶折算后按照280g/L浓度使用蒸馏水浸泡24h。取浸提液分别配制成；280g/L、200g/L、 120g/L、40g/L四个浓度梯度，备用。
沸水煎煮法：采集新鲜柳树叶，称量其鲜重，用烘箱烘干称量干物质重量计算出柳树叶的含水量，取一定量柳树叶折算后按照280g/L浓度放入铝锅内，电炉加热至沸腾30min。取煎煮液分别配制成；280g/L、200g/L、 120g/L、40g/L四个浓度梯度，备用。
乙醚萃取法：取沸水煎煮柳树叶4h的煎煮液50ml，使用等体积的乙醚萃取三次，留其上清液和沉淀，备用。
甲醇浸泡法：采集新鲜柳树叶，称量其鲜重，用烘箱烘干称量干物质重量计算出柳树叶的含水量，取一定量柳树叶折算后按照280g/L浓度甲醇浸泡24h。取浸泡液，备用。
1.3 小麦籽粒发芽处理
精选籽粒饱满大小均匀，无病虫害，胚部无损伤的小麦种子。用3%的次氯酸钠浸泡消毒30min。反复用蒸馏水冲洗后用蒸馏水浸泡12h，再用各浸提液浸泡12h。取浸泡好的种子将其腹沟朝下，置于垫有双层饱和湿润滤纸的培养皿中。每培养皿中放小麦种子50粒，设两个重复，以蒸馏水为对照。放入26℃恒温培养箱中培养，每隔12h观察一次，做好萌动发芽记录，以胚部破裂为萌动标准，以胚芽鞘长度达种子长度一半时为发芽标准。
2. 结果与分析
2.1 蒸馏水浸提方式对小麦籽粒发芽的影响

表1 柳树叶蒸馏水浸提液对小麦籽粒发芽的影响

处理	萌动率%		发芽率%
处理	36h	48h		60h	2h	84h	96h	108h
空白对照	100	100	98.0	100	100	100	100
40g/L	100	100		97.8	100	100	100	100
120g/L	94.6	95.7		96.6	99.2	99.5	99.5	99.7
200g/L	94.2	95.7		96.3	96.9	98.0	98.0	99.1
280g/L	65.5	91.0	93.9	95.6	97.2	98.0	98.0

柳树叶蒸馏水浸泡液对小麦籽粒发芽的影响结果如表1。可知：培养36h时间段，280g/L浓度处理与其它浓度处理和空白对照相比小麦籽粒萌动率差异显著，萌动率为65.5%，其它浓度处理和空白对照的萌动率都大于90%。随着时间的推移四种浓度的处理与空白对照相比无明显差异，而且在108h时抑制作用得到解除，种子发芽率恢复到正常水平。说明在蒸馏水浸泡液中抑制小麦发芽的物质含量低。
2.2 沸水煎煮提取方式对小麦籽粒发芽的影响

表2柳树叶沸水煎煮提取液对小麦籽粒发芽的影响

处理	萌动率%		发芽率 %
	36h 48h			60h 72h 84h 96h 108h
空白对照 40g/L 120g/L 200g/L 280g/L	77.5 a 76.3 a 59.4 a 34.3 a 0 b	98.5 a 98.1 a 97.1 a 74.4 a 18.4 b	85.0 a 81.7 a 63.5 a 57.7 a 28.7 b	96.1 a 95.3 a 93.6 a 93.2 a 49.9 b	99.0 a 98.0 a 97.6 a 93.2 a 52.4 b	100 a 98.6 a 97.6 a 94.9 a 63.3 a	100 a 98.6 a 97.6 a 96.0 a 81.2 a

注；小写字母为0.05水平下显著性比较（下同）。
柳树叶沸水煎煮提取液对小麦籽粒发芽的影响结果如表２。可以看出，280g/L、200g/L、 120g/L、40g/L四个浓度处理与空白对照相比，对小麦籽粒萌动发芽的影响不同，在48ｈ时间段，280g/L浓度处理小麦籽粒萌动率仅为18.4%,而其它三个浓度的萌动率依次为；74.4%、97.1%、98.1%。在36h--48h时间段，各个浓度对小麦籽粒发芽的抑制作用随着时间的推移而减弱。对于各个浓度来说，最低浓度40g/L处理的发芽率是100%,最高浓度处理的发芽率是81.2%，随着浓度的增加抑制效果相比于空白对照差异越明显。在108h后低浓度的处理抑制作用就可以解除，种子发芽率恢复到正常水平。说明沸水煎煮提取液中含有抑制小麦籽粒发芽的物质。
2.3 乙醚萃取、甲醇浸泡提取方式对小麦籽粒发芽的影响

表3 乙醚、甲醇浸提液对小麦籽粒发芽的影响

处理	萌动率%		发芽率%
	36h 48h			60h 72h 84h 96h 108h
空白对照甲醇对照乙醚对照甲醇浸泡乙醚沉淀乙醚萃取	88.9 a 88.6 a 84.2 a 6.6 b 0 b 0 b	77.9 a 77.0 a 76.4 a 0 b 0 b 0 b	86.3 a 86.0 a 85.1 a 0 b 0 b 0 b	87.0 a 86.3 a 85.9 a 1.0 b 0 b 0 b	99.0 a 97.5 a 97.3 a 1.0 b 0 b 0 b	100 a 99.5 a 99.7 a 1.9 b 0 b 0 b	100 a 99.5 a 100 a 2.9 b 0 b 0 b

由上述试验结果可知，柳树叶提取液中含有抑制小麦发芽的物质。根据有关研究，林木中含有的抑制物质易溶于乙醚和甲醇等有机溶剂。所以本试验另外采用乙醚萃取和甲醇浸泡两种提取方式研究柳树叶浸提物质对小麦发芽的影响。为了证明乙醚、甲醇试剂自身对小麦发芽没有影响，另外以乙醚空白、甲醇空白做对照，试验结果如表3。从总体上看，乙醚萃取上清液、沉淀以及甲醇浸提液对小麦籽粒发芽的抑制作用与空白对照相比差异达极显著水平，而且随着时间的推移这种抑制作用无明显变化。乙醚萃取上清液及其沉淀完全抑制小麦籽粒的发芽，而且这种抑制作用在整个试验期间没有变化，小麦发芽率为0。甲醇浸提液处理小麦籽粒在60h时间段的发芽率为0，随着时间的推移发芽率逐渐增大，但直到试验结束其发芽率没有大的改变，其发芽率为2.9%。相比于空白对照对小麦的抑制作用达显著水平，两种提取方式的提取液在整个试验期间其抑制作用没有太大的改变。乙醚对照、甲醇对照和空白对照三者相比于空白对照其发芽率无显著差异，说明乙醚、甲醇提取液对小麦发芽的抑制影响不是由试剂自身引起的，提取液中含有抑制小麦籽粒发芽的物质。
由表1、表2、表3比较可知，对于任何一种提取方式的提取物均能抑制小麦籽粒的发芽，其抑制强度比较为；乙醚萃取法＞甲醇浸泡法＞沸水煎煮法＞蒸馏水浸泡法。
3.讨论
柳树叶中可能含有对小麦籽粒发芽具有抑制作用的物质。本试验从不同的提取方式进行了研究。由表1.表2.表3.比较可知，在小麦籽粒培养72h时观察计算四种提取方式所得提取液处理小麦籽粒的发芽率分别是95.6%、49.9%、0、0、1%，在小麦培养108h时，四种提取液所处理小麦籽粒发芽率分别是98%、81.2%、0、2.9%。说明在四种柳树叶提取方式中，乙醚萃取液对小麦籽粒抑制作用最显著，甲醇浸泡液作用次之，二者相比于空白对照差异极显著有明显的抑制作用。水煮柳树叶0.5h提取液对小麦籽粒抑制作用与空白对照相比达显著水平，而且这种作用随时间的推移逐渐减弱，在108h时间段低浓度的处理对小麦的抑制作用就可以解除，种子发芽率恢复到正常水平。蒸馏水提取液对小麦子籽粒发芽的抑制作用不明显，说明提取液中抑制物质含量低。
通过本试验可知，柳树叶中可能存在对小麦籽粒发芽起抑制作用的物质。这种物质不易溶于水，溶于沸水，易溶于乙醚、甲醇。由于在溶液中的溶解度不同其溶液中的含量不同对小麦发芽的抑制作用也不同。有关各种提取液在大田抗小麦穗发芽应用方面的研究以及抑制机理有待于进一步的试验探讨和研究。