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相信大家也会遇到
液相色谱峰保留时间偏移的情况,其影响因素很多。下面就日常检测中关于合成着色剂色谱条件优化的经历进行描述,与大家分享一下个人体会和感悟。
一:优化前色谱条件
液相色谱仪:Agilent 1260 Infinity Ⅱ
色 谱 柱:Agilent EC-C18 4.6*100mm,2.7μm;
检测波长:254nm;590nm(亮蓝);
柱 温:35℃;
流 速:0.8mL/min;
流 动 相:A相:0.02mol/L乙酸铵溶液、B相:甲醇。
时间/min | A相/% | B相/% |
0.00 | 90 | 10 |
2.00 | 90 | 10 |
5.00 | 65 | 35 |
11.00 | 10 | 90 |
12.00 | 10 | 90 |
12.01 | 90 | 10 |
15.00 | 90 | 10 |
标准溶液:柠檬黄、新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、赤藓红8种合成着色剂的混标,浓度均为1.0mg/L。
像糕点这样复杂的基质,经前处理后上机,6min之前的目标物(柠檬黄、新红、苋菜红)的保留时间会产生漂移,但梯度变化后的目标物保留时间不变。这样不仅对定性造成一定困难,还使6min之前的极性杂质对目标物造成干扰,如图1。
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图1 色谱条件优化前样品中加标质控(上)与标准溶液(下)对比图
注:出峰顺序:柠檬黄、新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、赤藓红
二:优化后色谱条件
色 谱 柱:Agilent EC-C18 4.6*100mm,2.7μm;
检测波长:254nm;
柱 温:35℃;
流 速:0.8mL/min;
流 动 相:A相:0.02mol/L乙酸铵溶液、B相:甲醇。
时间/min | A相/% | B相/% |
0.00 | 95 | 5 |
2.00 | 95 | 5 |
8.00 | 65 | 35 |
11.00 | 10 | 90 |
12.00 | 10 | 90 |
12.01 | 95 | 5 |
15.00 | 95 | 5 |
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图2 色谱条件优化后样品中加标质控(上)与标准溶液(下)对比图
注:出峰顺序:柠檬黄、新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、赤藓红
首先将初始流动相乙酸铵溶液比例改为95%,然后将梯度变化变缓,使目标物延后出峰,这样既可避开极性杂质的干扰,又可使目标物出峰时间稳定,如图2。这样就解决了上述保留时间偏移及杂质干扰的问题。
另外保留时间偏移产生原因及相应措施有①漏液:检查漏液位置;②流动相比例变化:检查比例阀;③未平衡:空跑流动相至基线平直或直接进样以助于平衡;④流动相pH变化也会引起保留时间变化:重新配置流动相;⑤色谱柱污染:及时冲洗色谱柱,最后用高浓度有机相保存。
保留时间是
液相色谱定性的手段,定性之后才能定量。保留时间的稳定性是保证数据准确的前提条件。