主题：【第十届原创】合成着色剂的检测之液相色谱条件的优化

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发表于：2017/07/24 13:51:19 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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7月三等奖

相信大家也会遇到液相色谱峰保留时间偏移的情况，其影响因素很多。下面就日常检测中关于合成着色剂色谱条件优化的经历进行描述，与大家分享一下个人体会和感悟。
一：优化前色谱条件
液相色谱仪：Agilent 1260 Infinity Ⅱ
色谱柱：Agilent EC-C18 4.6*100mm，2.7μm；
检测波长：254nm；590nm（亮蓝）；
柱温：35℃；
流速：0.8mL/min；
流动相：A相：0.02mol/L乙酸铵溶液、B相：甲醇。

时间/min	A相/%	B相/%
0.00	90	10
2.00	90	10
5.00	65	35
11.00	10	90
12.00	10	90
12.01	90	10
15.00	90	10

标准溶液：柠檬黄、新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、赤藓红8种合成着色剂的混标，浓度均为1.0mg/L。
像糕点这样复杂的基质，经前处理后上机，6min之前的目标物（柠檬黄、新红、苋菜红）的保留时间会产生漂移，但梯度变化后的目标物保留时间不变。这样不仅对定性造成一定困难，还使6min之前的极性杂质对目标物造成干扰，如图1。

图1 色谱条件优化前样品中加标质控（上）与标准溶液（下）对比图

注：出峰顺序：柠檬黄、新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、赤藓红

二：优化后色谱条件
色谱柱：Agilent EC-C18 4.6*100mm，2.7μm；
检测波长：254nm；
柱温：35℃；
流速：0.8mL/min；
流动相：A相：0.02mol/L乙酸铵溶液、B相：甲醇。

时间/min	A相/%	B相/%
0.00	95	5
2.00	95	5
8.00	65	35
11.00	10	90
12.00	10	90
12.01	95	5
15.00	95	5

图2 色谱条件优化后样品中加标质控（上）与标准溶液（下）对比图

注：出峰顺序：柠檬黄、新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、赤藓红

首先将初始流动相乙酸铵溶液比例改为95%，然后将梯度变化变缓，使目标物延后出峰，这样既可避开极性杂质的干扰，又可使目标物出峰时间稳定，如图2。这样就解决了上述保留时间偏移及杂质干扰的问题。
另外保留时间偏移产生原因及相应措施有①漏液：检查漏液位置；②流动相比例变化：检查比例阀；③未平衡：空跑流动相至基线平直或直接进样以助于平衡；④流动相pH变化也会引起保留时间变化：重新配置流动相；⑤色谱柱污染：及时冲洗色谱柱，最后用高浓度有机相保存。
保留时间是液相色谱定性的手段，定性之后才能定量。保留时间的稳定性是保证数据准确的前提条件。