主题：【求助】求助：色谱柱跑出来的峰分裂了怎么办

看你图三样品信号比图一低很多，是不是杂质峰没有给开的干扰造成的？
如果不是杂峰干扰但是样品峰明显拖尾，可能是过载、污染、死体积过大或预柱污染等原因一起的

第一张图的响应值很高，估计进样浓度很大，上时间以此浓度进样会缩短色谱柱使用时间，容易引起色谱柱污染。第三张图上响应不大，过载的可能性不大，估计是色谱柱被污染了

原文由 冰块(burningsnow) 发表:
看你图三样品信号比图一低很多，是不是杂质峰没有给开的干扰造成的？

如果不是杂峰干扰但是样品峰明显拖尾，可能是过载、污染、死体积过大或预柱污染等原因一起的

用了新柱子来跑跟图三一样的样品，峰型没那么宽，也没有分裂，样品应该是没有过载的。从柱效结果来看，如果柱子被污染了甲苯测出来的塔板数会不会没那么高。假如确实是您说的污染，那应该要怎么处理好？这损耗柱子的速度，伤不起啊

原文由 bingwang228(bingwang228) 发表:

第一张图的响应值很高，估计进样浓度很大，上时间以此浓度进样会缩短色谱柱使用时间，容易引起色谱柱污染。第三张图上响应不大，过载的可能性不大，估计是色谱柱被污染了

意思是柱子被甲苯污染了？这种情况有建议处理的方法不？谢谢了啊

原文由 lyly1987(lyly1987) 发表:

原文由 bingwang228(bingwang228) 发表:

第一张图的响应值很高，估计进样浓度很大，上时间以此浓度进样会缩短色谱柱使用时间，容易引起色谱柱污染。第三张图上响应不大，过载的可能性不大，估计是色谱柱被污染了

意思是柱子被甲苯污染了？这种情况有建议处理的方法不？谢谢了啊

冲洗色谱柱试试效果。要延长色谱柱使用寿命可以从优化色谱条件，改善样品前处理，另外降低进样量或稀释后进样。从第一张图的响应值觉得进样量过大或者浓度太高

http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20131009/5001646/
这个你看看，挺不错的，按你说的应该是污染造成的，加个保护柱或者预柱吧，对柱子是个保护。样品能前处理一下也比较好。

原文由 冰块(burningsnow) 发表:
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这个你看看，挺不错的，按你说的应该是污染造成的，加个保护柱或者预柱吧，对柱子是个保护。样品能前处理一下也比较好。

级别不够看不了。。。。能麻烦您copy一下发给我不？3Q

lz 可以换的色谱柱检测 试试看

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原文由 冰块(burningsnow) 发表:
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这个你看看，挺不错的，按你说的应该是污染造成的，加个保护柱或者预柱吧，对柱子是个保护。样品能前处理一下也比较好。

级别不够看不了。。。。能麻烦您copy一下发给我不？3Q

以下为转帖

色谱双峰产生的可能及判断和处理 

HPLC分析中，在色谱柱正常，样品灵敏度足够，分析方法合适，色谱峰在出峰时间较短的条件下（不包括梯度），峰型应对称而尖锐。但是，在对样品了解程度不够，方法不妥，样品处理方法及进样方式不合理下，会出现各种意想不到的问题，而对色谱峰难以作出合理的解释，尤其对于新手更是如此。  色谱双峰指的是不是一种物质，但在色谱图中出现双峰，而表明含二种物质。可将这种情况分为三种原因。

1 色谱柱

如果你分析样品时发现每个色谱峰都双峰出现（出峰越快，双峰的可能性会减少），尤其采用单一纯物质时，可以肯定色谱柱出问题－柱头受损或柱头固定相变脏或流失。如果进样量少，原来色谱柱正常，色谱峰的形状多为一大峰带一小峰，不一定拖尾，这一般应是柱头受堵，将色谱柱反过来接，用流动相冲洗或酸洗或其它溶剂，将堵在柱头的残留物冲掉，再反过来，一般情况下就行了。当然不反冲，正冲有时也会正常的。如果峰拖尾，双峰强弱相差不大，柱头固定相变脏或流失可能性更大，这是可以将进样那头拧开，将微孔滤片超声，柱头刮去一部分填料，重新填上新填料拧紧，不过这种活，需要一定技术，同时不能老干那种事，否则用不了几次，色谱柱就会应柱效很低而报废。

2 溶剂极性及进样量

许多HPLC分析者对此可能不以为然，一般的HPLC的书籍和文献都不会提到这方面的内容，而这确是双峰产生的一个很重要的原因。目前HPLC分析多为反相色谱，流动相多为甲醇、乙腈、水，加各种添加剂以改善分离性能。样品一般用与流动相相溶的溶剂溶解。最佳的溶解方法是用流动相溶解，但是很多情况是不一致的。当用溶剂极性强度大的试剂，如纯甲醇、纯乙腈，纯乙醇，而分析体系中以水为主，样品进样量大，如定量管为20ul，此条件下完全可以肯定，单一的纯物质出双峰，第二峰比第一峰小（每次都不太一样），且拖尾，保留时间会提前（相对进样量少而言），将进样量减少一半以上，峰型将变为正常。这是样品的溶剂与流动相极性相差太大，而流动相来不及将其稀释达到平衡造成的。上面提到进样量造成双峰的一个原因，另一个原因是，进样量不一定大，但绝对量很大，色谱图上的双峰紧靠在一起，基本上齐高，不拖尾（如果出峰很快，也可能是色谱柱问题）。将样品稀释再进样就可以了，这是由于进样量过大，色谱柱过载造成的。

3 样品的特性

有些样品由于其化学结构的特点，存在互变异构现象，而这种互变异构体无法分开，而是以一个动态平衡存在。在色谱分析时，在一个特定的条件下，一种物质将出现双峰，双峰靠的很近，基本齐高，不拖尾，条件稍一变化，尤其pH，双峰现象将消失，如红霉素等。有的样品紫外的色谱图上看不到双峰，但在LC-MS下，用质谱检测器，其质谱的总离子流图上较明显，例如农药啶虫眯（吡虫清）。

色谱柱柱头塌陷或柱头填料污染。