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液相色谱（LC）
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主题：【求购】求助:哪位仁兄赐教一下免疫亲和色谱柱

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daj
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发表于：2006/12/14 14:05:00 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
牌子我不确定,好象叫做唯康的
今天友人问我,我以前没听说过,特请高手赐教
急!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
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2006/12/15 9:11:00 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
查到了,呼呼!!!!!!
是Vicam的
今年三月份被Waters吃掉了已经
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flyaway
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2006/12/15 21:18:00 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 daj 发表:
查到了,呼呼!!!!!!
是Vicam的
今年三月份被Waters吃掉了已经

哦～其机理，楼主可否分享一下呢？
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daj
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2006/12/17 19:58:00 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
一\亲和色谱（Affinity chromatography）
    所谓亲和色谱就是将亲和技术和色谱技术集成得到的一种高效分离手段，其原理与亲和吸附基本类似，所不同的是经过修饰的载体颗粒是填充在色谱柱中，以实现连续的色谱分离
载体活化、配基连接、吸附、洗脱


二\蛋白质分离常用的色谱方法
1、免疫亲和层析
属于吸附色谱中的一种，利用抗原-抗体作用的高度专一性以及较强的吸附力，实现特殊蛋白质的分离
免疫亲和层析介质的获得：
（1）获得抗体
（2）抗体连接到载体上
2、疏水层析
在载体表面连接上疏水的直链碳链或其他疏水基团，如苯基，可以与蛋白质的某些疏水基团相互作用，从而实现多组分的分离。
3、离子交换色谱是最常用的蛋白质分离手段
操作要点：
由于蛋白质是两性电解质，在不同的pH值下，其解离程度是不同的，因此既可以采用阳离子交换，也可以用阴离子交换，可视具体情况而定
由于蛋白质的极性基团很多，为了避免洗脱困难，通常采用弱阳或弱阴离子交换剂
适当调节缓冲溶液的pH值，使蛋白质适当解离，通常采用的pH值靠近其等电点（不是等电点）
缓冲溶液的离子强度不能过高，通常在10~20m mol
层析方案的确定，需要视试验情况作适当调整
洗脱方式：pH梯度
          离子强度梯度
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