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液相色谱（LC）

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主题：【第十届原创】一种检测辣椒红素含量的方法

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海润Kevin

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发表于：2017/08/07 15:37:40 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

维权声明：本文为p3081717原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。

8月三等奖

1.前言：
辣椒红素是从成熟红辣椒果实中提取的四萜类天然色素，属类胡萝卜素。辣椒红素色泽鲜艳，色价高，着色力强，保色效果好，安全性高，在食品工业应用广泛，可用于水产品、肉类、糕点、色拉、罐头、饮料等各类食品的着色。作为一种天然色素，联合国粮农组织（FAO）和世界卫生组织（WHO）将辣椒红素列为A类色素，在使用中不加以限量。我国食品卫生法规定辣椒红素可应用于多种食品、医药以及化妆品中。目前测定辣椒红素的方法有薄层色谱法、比色法，也有采用HPLC测定的报道，但仅限于检测辣椒中的辣椒红素，未见有香肠中辣椒红素的检测方法，因此，目前急需一种高效、准确的方法来进行香肠中辣椒红素的检测。
2.分析步骤
2.1储备液的配制
准确称量10.00mg辣椒红素，溶解到丙酮中，定容到10mL，作为1000μg/mL的储备液（实际浓度应乘以辣椒红素的纯度），置于-18℃冷藏保存；
2.2标准中间液的配制
准确量取2mL辣椒红素，溶解到正己烷中，定容到10mL，作为200μg/mL的中间液，置于4℃冷藏保存；
2.3标准工作曲线的配制
用标准中间液配制成1、2、5、10、20、50、100μg/mL的标液作为工作曲线用的标准溶液。
2.4样品处理
精确称取2.00样品于50mL离心管中，15mL的丙酮超声提取30min，离心，上清液转移至100ml梨形瓶中。残渣用15ml丙酮重复提取一次，离心，上清液合并到梨形瓶中。37℃旋干（若最后有水残留，加异丙醇旋干）。用2mL正己烷复溶，过膜，上机。
2.5 HPLC测定
2.5.1仪器条件(Agilent 1260 )
2.5.2色谱参数：
色谱柱：Agilent ZORBAX RX—SIL，5μm，4.6mm *250mm
柱温：30℃
流速：0.8mL/min
进样量：20μL
流动相：正己烷：乙醇=90:10（V/V）
3.结果与分析
3.1保留时间：
20mg/L与50mg/L辣椒红素通过RX—SIL色谱柱分离，确定保留时间，如下图:

3.2检出限
在基质中添加相当于样品含有1.0mg/L的标准品，经前处理上机检测，计算其信噪比（S/N）＞10，如图：

3.34.4 线性关系
精密吸取辣椒红素标准品，用正己烷溶稀释成系列浓度为1，2，5，10，20，50，100，200mg/L标准溶液，分别进样测定，以峰面积响应为纵坐标，辣椒红素浓度为横坐标，得到辣椒红素的回归方程为Y=8.05659X-0.09749，相关系数：0.9998，线性关系良好。

4.5 空白样品添加回收：

回收率
名称	添加浓度	回收率%
名称	添加浓度	火腿肠	香肠
辣椒红素	spike-1mg/kg-1	88.71	91.27
	spike-1mg/kg-2	82.63	85.42
	spike-1mg/kg-3	84.25	86.33
	spike-1mg/kg-4	95.62	95.1
	spike-1mg/kg-5	91.59	89.74
	spike-1mg/kg-6	88.48	84.55
RSD%		5.36	4.57
辣椒红素	spike-20mg/kg	93.24	96.68
辣椒红素	spike-100mg/kg	98.44	98.69

添加回收选取市场上香肠及火腿肠做质控实验，回收均在80%-100%之间，方法稳定性良好。

5.0 结语

初步用正相色谱做脂溶性物质，对此类型化合物较理想，后续继续尝试中。

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2017/8/7 17:05:43 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

学习了，辣椒红色素用反相色谱能做出来吗

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p3256965

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2017/8/7 17:16:44 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

正相色谱？楼主用的很全面啊，

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風痕

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2017/8/7 17:33:24 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

有水加异丙醇为啥就可以旋干？请教楼主。

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有水有渝

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2017/8/8 13:49:04 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

检出限用10倍噪声是不是有点大了，这个达到常规的定量限的浓度了。

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有水有渝

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2017/8/8 13:52:54 地板管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 風痕(yiwang520) 发表:
有水加异丙醇为啥就可以旋干？请教楼主。

异丙醇沸点高达82.45 ℃，即使可以形成共沸物，但也不可能降到37 ℃，也请教为什么可以异丙醇，另外有水也没有关系吧，微量水完全可以与正已烷分层，应该不会影响检测。

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海润Kevin

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2017/8/8 14:45:38 6楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 p3256965(p3256965) 发表:
正相色谱？楼主用的很全面啊，

对用正相色谱做的

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海润Kevin

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2017/8/8 14:47:24 7楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 風痕(yiwang520) 发表:
有水加异丙醇为啥就可以旋干？请教楼主。

水和异丙醇是互溶的，异丙醇的沸点比水的低，在抽真空状态下，异丙醇更容易旋出并将水带出。

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海润Kevin

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2017/8/8 14:53:04 8楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
异丙醇沸点高达82.45 ℃，即使可以形成共沸物，但也不可能降到37 ℃，也请教为什么可以异丙醇，另外有水也没有关系吧，微量水完全可以与正已烷分层，应该不会影响检测。

异丙醇沸点高达82.45 ℃，旋转蒸发仪是使烧瓶在最适合速度下恒速旋转以增大蒸发面积。通过真空泵使蒸发烧瓶处于负压状态。蒸发烧瓶在旋转同时置于水浴锅中恒温加热，瓶内溶液在负压下在旋转烧瓶内进行加热扩散蒸发，加热温度可接近该溶剂的沸点，同时异丙醇和水时互溶的，异丙醇易挥发时会逐渐将水带离。个人理解及实验得出

，不当之处敬请指正版主。

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海润Kevin

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2017/8/8 14:53:20 9楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 風痕(yiwang520) 发表:
有水加异丙醇为啥就可以旋干？请教楼主。

，不当之处敬请指正。

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有水有渝

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2017/8/8 16:19:57 10楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 海润Kevin (p3081717) 发表:
异丙醇沸点高达82.45 ℃，旋转蒸发仪是使烧瓶在最适合速度下恒速旋转以增大蒸发面积。通过真空泵使蒸发烧瓶处于负压状态。蒸发烧瓶在旋转同时置于水浴锅中恒温加热，瓶内溶液在负压下在旋转烧瓶内进行加热扩散蒸发，加热温度可接近该溶剂的沸点，同时异丙醇和水时互溶的，异丙醇易挥发时会逐渐将水带离。个人理解及实验得出，不当之处敬请指正版主。

这个要看你的负压达到多少，如果负压达到-0.09MPa以下，水的沸点可以降到40度以下，按这个原理，用无水乙醇代替异丙醇是不是更好

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