主题:【求助】测红霉素标准曲线都在同一线上...

浏览0 回复6 电梯直达
小汎汎兒
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如题,我配置了5个红霉素标准品浓度,衍生物是FMOC-Cl, 流动相乙腈:磷酸氢二甲
结果HPLC跑出来面积差不多,位置也一样,根本无法算斜率了...配置标品过程没错啊...
有谁遇到过这种情况吗?
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是否因为衍生反应不完全,控制的条件不一致,或者衍生反应试剂不足。
夏天的雪
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您定量的峰会不会是衍生试剂的峰,有没有做空白?找找有没有其他峰,没有就加大浓度,然后检查衍生过程,衍生的时间、温度以及pH
hujiangtao
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有水有渝
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楼主依据的是哪个方法,估计是没有衍生好,另外那个峰到底是红霉素的峰还是衍生试剂的峰弄清楚一下
小汎汎兒
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原文由 夏天的雪(bingwang228) 发表:
您定量的峰会不会是衍生试剂的峰,有没有做空白?找找有没有其他峰,没有就加大浓度,然后检查衍生过程,衍生的时间、温度以及pH


您好,有作空白,衍生条件如下,连空白的都看不出来主峰...
吸取一定量的红霉素标液,加乙腈定容到200μL,再加入100μL碳酸钠-碳酸氢钠缓冲溶液,100μL2.5mg/mL的衍生试剂FMOC-CL,按V(乙腈):V(水)=1:1定容到1mL,混合均匀,在室温反应1h后用液相色谱分析。
衍生空白红霉素
夏天的雪
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流动相呢?还有标准溶液的溶剂是什么?空白比较干净,标准溶液出的峰很多,有点不正常

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