主题：【分享】高效液相色谱仪测定 苦杏仁中的苦杏仁苷含量

1摘要
  本文根据《中国药典》2015版要求，测定中药饮片苦杏仁中苦杏仁苷含量的高效液相色谱方法，按中国药典条件，适当调整柱温，苦杏仁苷保留时间RSD%在0.31%，峰面积RSD%为1.40%。
关键词：中药饮片苦杏仁苦杏仁苷高效液相色谱
苦杏仁苷主要存在于苦杏、苦扁桃、桃、油桃(nectarines)、枇杷、李子、苹果、黑樱桃等果仁和叶子中。由龙胆二糖和苦杏仁睛组成的β-型糖苷。可特异性地抑制阿脲所致血糖升高和抗凝血作用。
苦杏仁苷中毒非常严重．大都在食入果仁后1～2小时内发作。早期表现为精神不振、烦躁不安、头痛、头晕、流口水、恶心呕吐。症状会逐渐加重．出现呼吸抑制、意识丧失、牙关紧闭、抽搐以及体温．血压下降．常常危及生命。因此检测苦杏仁具体含量，意义重大

图1 苦杏仁苷结构式

2检测部分
2.1仪器
本实验使用赛那尔H6000高效液相色谱仪系统。具体配置为H6000系列的两台输液泵、一台紫外可见光检测器、一台柱温箱溶剂管理器和spark Alias自动进样器；sainaer色谱工作站。

2.2  分析条件
色谱柱：岛津WondaSilC18 Superb 5um
流动相：乙腈：0.1%磷酸=8:92（V/V）
流速：1ml/min
柱温：35℃
检测波长：207nm
进样量：10μL
等度洗脱
2.3  标准品溶液的配制和样品处理
标准品品溶液的制备  取苦杏仁苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得。
样品溶液的制备  取干燥好的山杏种子，粉碎，粉末过二号筛，称取约0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率50kHz）30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，精密量取续滤液5ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，制备好样品溶液。

3结果
3.1  标样的色谱图

图2 40μg/ml标准品色谱图

3.2  线性关系
将配制浓度为40μg/ml的标准溶液，分别稀释成5μg/ml, 10μg/ml,20μg/ml, 30μg/ml和40μg/ml进样采集数据，以峰面积为横坐标，浓度为纵坐标绘制工作曲线，所得曲线良好，R达到0.999以上。标准品的浓度及峰面积的结果见表1。

级别	浓度（μg/ml）	峰面积
1	5	112587
2	10	212458
3	20	321247
4	30	433587
5	40	554228

表1 苦杏仁苷浓度及峰面积

图3 苦杏仁苷的标准曲线                     

3.3  精密度试验
40μg/ml的苦杏仁苷标准品连续测定6次，考察方法的精密度，保留时间和峰面积的RSD%结果如表2所示：

序号	保留	峰面积
1	29.291	542152
2	29.542	555212
3	29.458	534879
4	29.423	548721
5	29.542	548524
6	29.354	554258
平均	29.435	547291
RSD%	0.343	1.40

表2  苦杏仁苷重复性数据（n=6）

3.4  样品测试
使用2.3配制好的苦杏仁苷样品溶液得出图4图谱：

图4 苦杏仁样品图谱

组份名	保留时间（min）	面积	含量（%）
苦杏仁苷	29.630	576392	1.6

表3 苦杏仁中苦杏仁苷测定结果

4结论
经测试，本方法的工作曲线好R=0.999以上。数据重现性好，保留时间RSD%=0.34%（n=6），小于国家要求0.5%以内，峰面积RSD%=1.40%（n=6），小于国家要求2.0%以内。并且峰形完好，拖尾因子为1.02。说明此方法适用于检测苦杏仁中苦杏仁苷的含量。