维权声明:本文为nphfm2009原创作品,本作者与仪器信息网是该作品合法使用者,该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为,我们将追究法律责任。
水产品中孔雀石绿、结晶紫的测定
样品基质:活鳗、烤鳗、水产品;检测项目:孔雀石绿、隐性孔雀石绿、结晶紫、隐性结晶紫;定量下限:0.5 μg/kg;
检验依据:GB/T 19857-2005(
LC-MS-MS); 加标水平:0、0.5、1.0、2.0、5.0 μg/kg; 加标曲线浓度:0、0.5、1.0、2.0、5.0 ng/mL;
样品前处理:
准确称取2.00 g试样(精确至0.01 g)于50 mL离心管内,
加入0.05 μg/mL内标工作液0.2 mL,加入1.0mL0.25g/mL盐酸羟胺溶液、2mL0.1mol/L乙酸铵缓冲溶液、2mL1.0mol/L对甲苯磺酸溶液和20 mL乙腈
,用均质机以10000 r/min 的速度均质30 s,加入5g中性氧化铝,振摇,将离心管置于离心机内以3500 r/min的速度离心5 min,上清液转移到装有40mL二氯甲烷的分液漏斗中,振荡30s,静置分层,取下层溶液至150 mL梨形瓶中, 40℃减压旋转蒸发至干,后用2 mL乙腈+水(1+1)
溶液涡旋洗脱,取清液用0.2 μm有机微孔滤膜过滤,上机测试。
【说明】
标准是过中性氧化铝柱,本方法中加入中性氧化铝粉末
标准上鲜活水产品用2 mL(乙腈:5mmol/L乙酸铵=1:1)定容,加工水产品用10 mL 38%甲醇直接用乙腈提取,过中性氧化铝柱,加工水产品提取方法与本方法相同,用中性氧化铝和阳水(含2%乙酸铵)溶液定容。
标准鲜活水产品离子交换柱净化,方法中所有样品提取方法均与标准中加工水产品相同,用中性氧化铝粉末净化。
标准曲线使用液的配制:
标准工作溶液:取1.0 μg/mL标准中间液0.5 mL,用50%乙腈水定容至10 mL,混匀,浓度为0. 05 μg/mL (该溶液临用现配),
取0.05 μg/mL标准中间液2.0mL于10mL容量瓶中,50%乙腈水定容,混匀,浓度为0.01μg/mL(该溶液临用现配);内标工作溶液:取1.0 μg/mL内标中间液0.5 mL,用50%乙腈水定容至10 mL,混匀,浓度为0. 05μg/mL (该溶液临用现配)。
孔雀石绿、结晶紫标准曲线方程、相关系数:
仪器及方法检出限:
标准溶液MRM图(0.5ng/mL+5ng/mL内标):
样品测定MRM图:
样品加标(0.5ng/mL)测定MRM图:
加标回收率情况:
总结:
1、
每批样品检测应包含试剂空白、标液曲线、样品空白、样品空白加标、样品。
2、
标液曲线:分别移0、0.1、0.2、0.4、1.0mL 0.05 μg/mL混合标准溶液至10mL容量瓶中,分别加入0.05μg/mL内标中间液1.0mL,50%乙腈水定容,混匀,浓度分别为0、0.5、1.0、2.0、5.0ng /mL(各含内标5.0 ng /mL);3、加标回收:添加0.01μg/mL混合标准工作液0.1mL于空白样品中,相当于0.5 μg/kg水平; 4、初测加标可选适用基质的任一样品空白进行加标,如遇特殊基质(如饲料)应多做一个该基质中的加标回收实验(加标浓度为2.0μg /kg),复测时样品(包括特殊基质)做平行试验,如初测含量在曲线范围外,复测时应增大曲线范围,使样品中的含量在曲线范围内。
5、由于检测中有加入内标,故检测结果无需校正回收率(包括特殊基质)。
6、
实验中用的记号笔有可能会含有显性孔雀石绿和显性结晶紫,若发现实验不正常时需检测记号笔中是否含有此两种成分;7、每次检测结果应与标准谱图对照,每次实验用内标监控回收率,特殊基质应直接用该基质做质控点监控回收率。