主题：【原创】小麦粉中赭曲霉毒素A的测定

赭曲霉毒素是继黄曲霉毒素后又一个引起世界广泛关注的霉菌毒素。现已发现有7种曲霉和6种青霉菌能产生赭曲霉毒素A。该毒素主要污染粮谷类农产品如燕麦、大麦、小麦、玉米、动物饲料和动物性食品(如猪肾脏、肝脏)等。赭曲霉毒素主要侵害动物肝脏与肾脏。这种毒素主要是引起肾脏损伤，大量的毒素也可能引起动物的肠黏膜炎症和坏死。还在动物试验中观察到它的致畸作用。其中，赭曲霉毒素的毒性强弱顺序是：OTA>OTC>OTB，本实验主要针对小麦粉中赭曲霉毒素A的测定。

赭曲霉毒素

参考标准
《GB 5009.96-2016 食品安全国家标准 食品中赭曲霉毒素A的测定》第一法
实验步骤
甲醇-水（80:20）：80mL甲醇+20mL水，混匀
磷酸缓冲溶液：称取8.0g氯化钠，1.2g磷酸氢钠，0.2g磷酸二氢钾，0.2g氯化钾溶解于约990mL水中，用浓盐酸调节pH至7.0，用水稀释至1L


（1）样品提取
称取5g小麦粉试样于50mL离心管中，加20mL甲醇水（80：20）混合溶液，震荡30min：8000r/min离心3min， 移去10mL上清液，加入磷酸缓冲溶液40mL，经过8000r/min离心3min备用。


（2）样品净化
活化：将赭曲霉毒素A免疫亲和柱放置到室温，然后接上注射器
上样：将上述提取液全部转移到注射器上，以1滴/s的速度通过免疫亲和柱，弃流出液
淋洗：先用10mL磷酸缓冲溶液淋洗，再用10mL水淋洗，然后将小柱抽干
洗脱：准确加入1mL甲醇洗脱至进样瓶中，抽干，待HPLC分析。


（3）仪器条件
HPLC条件
色谱柱：Welch Ultimate AQ-C18 4.6×150mm，5μm
仪器型号：waters2695+FLR2475
流动相：A:2%冰乙酸水溶液  B：乙腈 等度洗脱：A：B(50：50)
柱温：35℃
流速：1.0mL/min
检测波长：激发波长333nm    发射波长 460nm 进样体积：10μL


（4）实验图谱及结果

图1 赭曲霉毒素A样品加标1μg/kg液相色谱图

图2 赭曲霉毒素A样品加标2μg/kg液相色谱色谱图

由表1可知，采用免疫亲和柱结合液相色谱法检测赭曲霉毒素A，加标量为1μg/kg和2.0μg/kg的样品进行了检测，回收率在85.33%~101.94%，能够满足检测要求。由图1可看出经赭曲霉毒素A免疫亲和柱净化，采用月旭Xtimate C18色谱柱检测峰形良好，保留时间稳定。

表1 赭曲霉毒素A加标回收实验结果(n=6)

（5）实际样品检测
为了保证小麦粉样品的代表性，从多家超市以及菜场选择具有代表性的10个小麦粉样品进行检测，结果均为未检出。

（6）结论
本实验建立了赭曲霉毒素A检测的HPLC检测方法，对于加标量为1.0和2.0μg/kg的样品进行了检测，回收率在85.33%~101.94%，符合国标要求，免疫亲和柱方法稳定并且色谱柱重现性良好，说明本方法能够用于检测食品中的赭曲霉毒素A的含量。


（7）订购指南
                                                                                                         

订货号	产品名称	包装规格
01140-06032	Welchrom 赭曲霉毒素免疫亲和柱	3mL，15支
00207-31041	Ultimate AQ-C18	5.0μm，4.6×150mm
031888-07	赭曲霉毒素A标准品	CAS No.:303-47-9，10 mg/l于乙腈：甲醇=1：1，1ml
00000-30016	50mL螺口尖底离心管	50支/包
00824-31001	Welch 固相萃取装置	12位方缸
WEL-REX-25A	固相萃取配套真空泵	抽气流量：25L/min
00802-02201	针头式过滤器 Nylon	13*0.22 100pk
00824-11101	一次性注射器	200pk/盒 带针头 橡胶头 1ml
00821-32291	盖子+垫片	预切口红色特氟龙/白色硅胶隔垫，9mm蓝色短螺纹开口盖 中心孔6mm 100pk
00821-40927	样品瓶	2ml 透明短螺纹广口样品瓶 带书写处 11.6*32mm 一级水解玻璃 100pk
00814-01010	乙腈-HPLC级	4L
00814-01008	甲醇-HPLC级	4L