主题：【第十三届原创】临床质谱发展探索-方法验证规范化

临床质谱发展探索-方法验证规范化

近年来,各种检验新理论和新技术不断涌现,极大地推动了临床检验学科的发展。液相色谱串联质谱（liquidchromatography-tandem mass spectrometry, LC-MS/MS）技术集液相色谱对复杂样本的高分离性能和质谱的高敏感性、高特异性于一体。

在采用LC-MS/MS技术开展临床检验前, 必须建立相应的检测方法并对其进行验证。由于临床检测多针对生物样本（血清、血浆、全血、尿液、唾液、脑脊液、干血滤纸片、组织等）,因此在方法开发过程中,需要对样本前处理方法、色谱条件和质谱条件进行开发和优化, 确保建立的方法适合临床检测需求。为了保证检测结果的准确、可靠,证明分析方法的性能符合临床检验的目的和要求,必须对建立的LC-MS/MS方法进行全面而严格的方法学验证。

自2001年5月起，我国开始发布质谱规范化指导文件，并分别在2007年10月、2012年2月、2014年10月、2017年10月和2019年3月更新了指导文件。国家标准化管理委员会在2020年第4号中国国家标准公告中发布了最新的《质谱分析方法通则》(GB/T 6041—2020)。该标准将代替GBT 6041—1985、GBT6041—2002。新标准将在2021年2月1日实施。

那么质谱为什么需要方法验证规范化，其意义是什么。规范方法验证的目的是统一标准，质谱作为一种高度复杂的技术，其内部原理复杂且易受到环境、溶剂、基质等影响，因此制定一份方法验证的规范是必要且必须的。

目前LC-MS/MS在临床实验室扮演着不可或缺的作用，因为它在特异性、灵敏度、多组分检测等方面有着无可比拟的优势，但这并不意味着液质技术一定能产生准确的结果，因为建立的液质联用方法中，需要考察的因素和排查的影响因素太多太多。例如单个样品进样顺利时，大量样本持续进样会不会顺利？样品置于进样器或桌面太久会不会其中的成分衰减？那么我们在临床质谱实施过程中，应对考虑到的因素有以下几点：

1. 方法实施后监控：SOP；性能监控；仪器维护；质量评价；质量控制；PT/EQA。

2. 方法验证：精密度；最低定量限；线性；准确性；精密性；残留；干扰；基质效应。

3. 方法开发：基质选择；采血管类型；内标选择；试剂和样品稳定性；样品处理方法；液相色谱方法；质谱检测条件。

4. 评估方法可行性：改善医疗水平；资源的可用性。

质谱检测项目属于LDT的范畴。美国临床病理学会和临床实验室改进咨询委员会对LDT定义为：实验室内部研发、验证和使用，采用生物化学、细胞遗传学、分子生物学试验方法，以诊断为目的，分析DNA、RNA、线粒体、蛋白组和代谢组疾病等生物标志物的体外诊断项目；LDT仅能在研发的实验室使用；可使用购买或自制的试剂，但不能销售给其他实验室、医院或医生；LDT的开展不需要经过食品药物管理局(Food and Drug Administration，FDA)的批准。

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