我是如何证明某非洲猪瘟检测试剂盒存在质量问题并成功维权的

1背景

2019年11月，本单位购入一批某品牌非洲猪瘟检测试剂盒，用于非洲猪瘟病毒核酸荧光定量PCR检测。该试剂盒中的DNA提取为柱式提取，DNA扩增试剂为所有组分预先混合，使用时每个样品按18μL预混液加2μLDNA模板即可，使用非常方便。

简单说一下该试剂盒的结果判定，在阴性、阳性对照成立的情况下，Ct值小于40且有典型扩增曲线的判定为阳性，否则判定为阴性。

2出现问题

购入试剂盒后，本单位即投入使用。在对一个猪场抗凝血进行检测时，结果有40%左右阳性，Ct值介于35~38左右。由于该猪场日常生物安全管理水平较高，该批抗凝血又是从准备销售给外省的生猪中抽样，出现非常猪瘟的可能性不大。出于慎重起见，第二天我们对提取的核酸重新进行扩增，结果仍有40%左右阳性。

由于阳性比例过高，且Ct值较高，怀疑是污染或试剂存在问题。于是要求猪场重新采样，再次进行核酸提取和扩增，结果仍然出现40%左右阳性。

3初步验证

为了分析这些阳性是真阳性还是污染或试剂的问题，我们做了交叉试验，方法及结果如下：

项目	该试剂盒提取核酸	其他品牌试剂盒提取核酸
该试剂盒扩增核酸	阳性率40%	阳性率<5%
其他品牌试剂扩增核酸	阳性率<5%	均为阴性

据此我们认为是该试剂盒存在问题，向厂方提交了质量投诉函，要求调换货。

4厂家验证

接到我们的质量投诉函后，厂方非常重视，派出技术人员打飞的直奔我们实验室进行实验。经过一系列去污染等措施，结果用该品牌试剂盒提取核酸并进行扩增，结果仍然出现阳性，但阳性率明显下降，约为10%。据此技术人员认为是实验室污染所致，但对于为何仍有10%阳性不予置评。此后，厂方一直未同意调换货。

5再次验证

接下来，我们又进行了多次实验，并采取各种防污染措施，但阳性率一直居高不下。对此我们也没有好办法，只能将Ct值超过35的假阳性样品用其他扩增试剂再复核一遍。

今年1月份我们实验室新购进一批qPCR预混液，并合成了一系列不同项目的引物探针（其中非洲猪瘟引物探针与某品牌序列不一致）。2-3月份对不同项目的阳性样品（抗原、疫苗等）进行验证，证明合成的引物探针及qPCR预混液检测效果理想（相关内容将以系列方式在原创大赛发表，敬请期待）。2020年4月1日对某猪场血样进行检测，血样经离心取上清（血浆），采用该品牌的DNA提取试剂盒提取核酸，检测试剂盒进行扩增，扩增图谱见图1（阳性对照是Ct值约25的那根弯弯曲曲的红线）。

后采用T/CVMA5-2018《非洲猪瘟病毒实时荧光PCR检测方法》提供的引物探针，以及商品qPCR预混液，扩增图谱见图2（所有样品均为阴性，有曲线的5个是为了验证扩增效果添加的阳性核酸）。从两个扩增图谱可以看出，同样用该品牌提取试剂盒提取的核酸，用该品牌的扩增试剂，与商品qPCR预混液扩增相比，效果差异极大，不仅阳性对照存在问题，而且对于正常样品也存在很高的假阳性。

对于商品qPCR预混液的质量，可以从另一个方面来说明：添加的5份阳性核酸，系2019年4月提取后-20℃保存的，至今已近一年。5份阳性核酸当时的扩增结果与本次qPCR预混液扩增结果分别为：18.3/21.9、16.1/18.9、31.1/32.9、30.5/33.0、30.7/33.8。时隔一年两次扩增的Ct值约相差3左右，考虑到核酸保存条件、保存时间以及两次不同的扩增试剂，我们认为两次扩增结果是非常吻合的。这也从一个方面证明本次我们采用的商品qPCR预混液扩增效果非常理想。

综上，我们认为该品牌的检测试剂盒存在质量问题，要求对所购的试剂盒予以全部调换为质量合格的新品。

6同意换货

接到投诉函后，该公司及时与我们进行沟通，一周后同意了我们的诉求，要求我们将所有试剂盒（已使用的提供含有批号等信息的原包装盒）寄还。十天后我们收到了新批号的检测试剂盒，拆开试用，发现该试剂盒已作了改进，反应液与引物探针分两管存放，用前将反应液加入引物探针中充分混匀，然后进行实验，经验证，假阳性现象不复存在。

7思考

作为生产厂家不能一味宠着使用者，还是应该从产品质量出发。目前国产试剂盒多采用反应液与引物探针分别存放的方式，每次使用需计算添加量，混合均匀后分装到每个PCR孔，不是很方便。该品牌或许是考虑到这个因素，将反应液与引物探针合二为一，大大方便了使用者，却不料在检测结果上出了问题。在未解决多种试剂混合后效果不佳问题前，还是应该尊重科学，以分别存放为宜。

作为使用者也不能一味追求方便快捷，还应该以检测质量为重。该麻烦的地方不能图省事，该分步操作的地方就应该按照要求分步操作，不能简单地合二为一。

维权不是简单的事，一般来说生产厂家总量比较强势，有众多的技术人员分析问题所在，也有可能有“大拿”找出各种理由让使用者背锅。作为使用者来说往往缺乏相应的验证手段和理论基础，在厂家面前往往显得比较弱势。但从我们的维权之路看，只要拿出较为有力的证据，厂家还是会虚心接受诉求。