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我是如何证明某非洲猪瘟检测试剂盒存在质量问题并成功维权的1
背景2019
年11
月,本单位购入一批某品牌非洲猪瘟检测试剂盒,用于非洲猪瘟病毒核酸荧光定量PCR
检测。该试剂盒中的DNA
提取为柱式提取,DNA
扩增试剂为所有组分预先混合,使用时每个样品按18μL
预混液加2μLDNA
模板即可,使用非常方便。简单说一下该试剂盒的结果判定,在阴性、阳性对照成立的情况下,Ct
值小于40
且有典型扩增曲线的判定为阳性,否则判定为阴性。2
出现问题购入试剂盒后,本单位即投入使用。在对一个猪场抗凝血进行检测时,结果有40%
左右阳性,Ct
值介于35~38
左右。由于该猪场日常生物安全管理水平较高,该批抗凝血又是从准备销售给外省的生猪中抽样,出现非常猪瘟的可能性不大。出于慎重起见,第二天我们对提取的核酸重新进行扩增,结果仍有40%
左右阳性。由于阳性比例过高,且Ct
值较高,怀疑是污染或试剂存在问题。于是要求猪场重新采样,再次进行核酸提取和扩增,结果仍然出现40%
左右阳性。3
初步验证为了分析这些阳性是真阳性还是污染或试剂的问题,我们做了交叉试验,方法及结果如下: 项目 | 该试剂盒提取核酸 | 其他品牌试剂盒提取核酸 |
该试剂盒扩增核酸 | 阳性率40% | 阳性率<5% |
其他品牌试剂扩增核酸 | 阳性率<5% | 均为阴性 |
据此我们认为是该试剂盒存在问题,向厂方提交了质量投诉函,要求调换货。4
厂家验证接到我们的质量投诉函后,厂方非常重视,派出技术人员打飞的直奔我们实验室进行实验。经过一系列去污染等措施,结果用该品牌试剂盒提取核酸并进行扩增,结果仍然出现阳性,但阳性率明显下降,约为10%
。据此技术人员认为是实验室污染所致,但对于为何仍有10%
阳性不予置评。此后,厂方一直未同意调换货。5
再次验证接下来,我们又进行了多次实验,并采取各种防污染措施,但阳性率一直居高不下。对此我们也没有好办法,只能将Ct
值超过35
的假阳性样品用其他扩增试剂再复核一遍。今年1
月份我们实验室新购进一批qPCR
预混液,并合成了一系列不同项目的引物探针(其中非洲猪瘟引物探针与某品牌序列不一致)。2-3
月份对不同项目的阳性样品(抗原、疫苗等)进行验证,证明合成的引物探针及qPCR
预混液检测效果理想(相关内容将以系列方式在原创大赛发表,敬请期待)。2020年4月1日对某猪场血样进行检测,血样经离心取上清(血浆),采用该品牌的DNA提取试剂盒提取核酸,检测试剂盒进行扩增,扩增图谱见图1(阳性对照是Ct值约25的那根弯弯曲曲的红线)。
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后采用T/CVMA5-2018《非洲猪瘟病毒实时荧光PCR检测方法》提供的引物探针,以及商品qPCR预混液,扩增图谱见图2(所有样品均为阴性,有曲线的5个是为了验证扩增效果添加的阳性核酸)。从两个扩增图谱可以看出,同样用该品牌提取试剂盒提取的核酸,用该品牌的扩增试剂,与商品qPCR预混液扩增相比,效果差异极大,不仅阳性对照存在问题,而且对于正常样品也存在很高的假阳性。![]()
对于商品qPCR预混液的质量,可以从另一个方面来说明:添加的5份阳性核酸,系2019年4月提取后-20℃保存的,至今已近一年。5份阳性核酸当时的扩增结果与本次qPCR预混液扩增结果分别为:18.3/21.9、16.1/18.9、31.1/32.9、30.5/33.0、30.7/33.8。时隔一年两次扩增的Ct值约相差3左右,考虑到核酸保存条件、保存时间以及两次不同的扩增试剂,我们认为两次扩增结果是非常吻合的。这也从一个方面证明本次我们采用的商品qPCR预混液扩增效果非常理想。
综上,我们认为该品牌的检测试剂盒存在质量问题,要求对所购的试剂盒予以全部调换为质量合格的新品。
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同意换货接到投诉函后,该公司及时与我们进行沟通,一周后同意了我们的诉求,要求我们将所有试剂盒(已使用的提供含有批号等信息的原包装盒)寄还。十天后我们收到了新批号的检测试剂盒,拆开试用,发现该试剂盒已作了改进,反应液与引物探针分两管存放,用前将反应液加入引物探针中充分混匀,然后进行实验,经验证,假阳性现象不复存在。7
思考作为生产厂家不能一味宠着使用者,还是应该从产品质量出发。目前国产试剂盒多采用反应液与引物探针分别存放的方式,每次使用需计算添加量,混合均匀后分装到每个PCR
孔,不是很方便。该品牌或许是考虑到这个因素,将反应液与引物探针合二为一,大大方便了使用者,却不料在检测结果上出了问题。在未解决多种试剂混合后效果不佳问题前,还是应该尊重科学,以分别存放为宜。作为使用者也不能一味追求方便快捷,还应该以检测质量为重。该麻烦的地方不能图省事,该分步操作的地方就应该按照要求分步操作,不能简单地合二为一。维权不是简单的事,一般来说生产厂家总量比较强势,有众多的技术人员分析问题所在,也有可能有“大拿”找出各种理由让使用者背锅。作为使用者来说往往缺乏相应的验证手段和理论基础,在厂家面前往往显得比较弱势。但从我们的维权之路看,只要拿出较为有力的证据,厂家还是会虚心接受诉求。