主题:【第十三届原创】大鼠血浆中氨甲环酸的测定

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sh104301
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背景:在一次建液质联用检测血浆样品中氨甲环酸含量的分析方法过程中,原先采用实验室现有Thermo Hypersil GOLD C18柱分离效果不好,峰型不美观, 依据氨甲环酸的理化性质,氨甲环酸为小分子极性化合物,尝试使用纳谱分析ChromCore HILIC-Amide柱测定,取得了非常完美的成效。

2019年下半年,本人忙于建立液质联用检测血浆样品中氨甲环酸含量的分析方法,在这过程中尝试了很多摸索工作,调整了很多条件,包括流动相、色谱条件、质谱各个参数,分离效果依旧不理想,检测方法始终建立不起来。在此之前,课题组做液质实验常年使用的均为赛默飞厂家的色谱柱,因此当我将其他能改变的因素都尝试过以后,方法仍旧建不起来的时候,我最终终于考虑到打破实验室传统,我要寻找其他色谱柱。就在这个时候,我经常订购试剂的试剂商向我推荐了纳谱色谱柱,当时我被纳谱吸引的只有一点,就是可以免费试用。

在此之前,我们课题组没人了解过色谱柱可以试用,赛默飞的销售也没办法提供试用,因此我第一反应就是纳谱牛逼,看来他们对柱子是有信心的。于是我申请了试用,收到柱子按说明书进行相关操作,战战兢兢的配好样品溶液,马不停蹄的将色谱柱测试安排起来,走起~~我的目的很简单,就是要和赛默飞的对比,我要知道我方法建不起来的原因到底和柱子有没有关系。

1. 实验步骤:

1样品制备

1) 混合对照品(定性)

精准称取 TA 标准品10mg100mL 容量瓶中,用流动相溶解并定容至刻度线,此储备液的质量浓度为100 μg/mL。称取10mg 顺式-4-氨基环己烷羧酸对照品于100 mL容量瓶中,用流动相溶解并定容至刻度,得内标储备溶液。分别精确吸取0.2mL TA 储备液与I.S. 储备液于100 mL容量瓶中,加入流动相定容至刻度,得200 ng/mL 混合对照品溶液。

2) 血浆质控样品

精密吸取100μL空白血浆,向其加10μL TA 标准溶液5 μg/mL,配制成相当于氨甲环酸血浆浓度为0.5 μg/mL浓度样品,按“血浆样品的处理”方法操作得质控样品。

3) 血浆样品处理

精密吸取100 μL加标血浆样品于1.5mL离心管中,加入质量浓度为5 μg/mL 内标溶液10μL3500r涡旋30s,再加入500μL甲醇,3500r涡旋1min13000g离心15min,取上清液2μL于装有洁净内衬管的进样瓶中分析测试。

2. 液相色谱仪器条件

色谱柱ChromCore HILIC-Amide,(3um, 2.1*150mm)

流动相10 mM甲酸铵(pH 3.8-乙腈=95 : 5v / v

流速0.2 mL/min

柱温30 ℃

进样量2 μL

检测器Thermo-Q-Exactive 四级杆-静电场轨道阱高分辨质谱

样品大鼠血浆中氨甲环酸

质谱仪器条件ESI+ 离子源,扫描模式为 Targeted - MS 2 - 正离子

峰名称:检测离子对分别为

TA m/z 158.1174 → 95.0859

内标物(I.S.m/z 144.1019 → 81.0704.

3. 图谱

本试验以比较实验室现有ThermoHypersil GOLD C18柱(100 mm × 2.1 mm, 3 μ m)与纳谱分析ChromCore HILIC-Amide,(3um, 2.1*150mm)两种色谱柱对同一样品的分离效果,以期寻求一款最佳可应用于氨甲环酸血样检测的分析柱,实验结果以表1形式呈现。

1 两种色谱柱对氨甲环酸分离效果比对




结论: 对于小分子的极性氨甲环酸来讲,Hilic柱相比较C18 柱的分离效果更具优势:首先同一浓度样品在相同的色谱、质谱条件下,Hilic色谱柱对氨甲环酸灵敏度更高(高出一个数量级);其次对于血浆样品来说,Hilic色谱柱的氨甲环酸图谱曲线更加美观,没有分叉峰、裂峰的出现。

实验结果很出乎意料,纳谱HILIC –Aimde真的把样品跑出来了!我真的是瞬间感受有一种背叛感,大牌没做到的,纳谱做到了,我认真的汇报了这次实验结果,老板开完组会直接对我说:买它。于是我成为了我们实验室第一个使用其他品牌液质色谱柱的人物,在我的推荐下,我博二师姐成为了第二位,我想,以后我的师弟师妹们会陆陆续续成为第三位、第四位等。

其实我说了这么多,无外乎就是把我激动的心情再重述一遍,我是20206月份的毕业生,药代实验是我课题的最后一部分,我的工作安排是2019年年底要把所有实验结束。那个时候方法一直建不起来,你们应该可以体会到我这个应届毕业生焦急的内心,所纳谱的出现,真的是一场及时雨,我真的非常激动,激动到我停下毕业论文的撰写,转战到这里来讲述我的兴奋与感谢。感谢我的销售,对我实验的跟进,感谢帮我联系技术人员,指导我,纳谱的产品到人员的服务,是我用过那么多柱子厂家中最满意的一家(做液相的时候用过迪马、YMC、赛默飞、岛津等),希望货真价实的国货之光——纳谱越来越好,记住,你不输给大牌。

本文为【纳谱分析第一有奖征文活动】获奖作品,原作者信息:

单位:中国科学院理化技术研究所

姓名:王*

谱柱信息:纳谱分析ChromCore HILIC-Amide,(3um, 2.1*150mm)
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同为氨甲环酸在测人员,现在已经摸索条件一个学期了,很崩溃,用的安捷伦的C18,但一直都信号值超低,不知道楼主有没有用安捷伦的柱子试过这个流动相,或者药典里面检测用的磷酸缓冲液:甲醇。真的求求经验,还想请教下怎么申请使用这款柱子,心动
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