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主题：【已应助】自下而上法LC-ESI-MS/MS检测靶蛋白，纯蛋白可检测出，血清中检测不出是什么原因？

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发表于：2021/07/17 10:31:14 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
实验步骤如下：

变性，还原、烷基化、加入内标肽，酶解后固相萃取，干燥复溶，最后LC-ESI-MS/MS检测特征肽和内标肽，碰撞能和流动相都优化后，纯蛋白响应值很高。

之后开始做血清标本，比处理蛋白多了一步去除高丰度蛋白步骤，也是严格按照试剂盒步骤做的，然而检测响应值只有500~1000。

血清中是有目标蛋白的，因为质谱检测前已经在自动生化分析仪上面检测到靶蛋白浓度大约有20ug/ml。

PS：质谱仪是AB SCIEX 5500QTRAP，以前师姐用上述的方法是可以在仪器上做出10000多的响应值，是不是说明方法建立这块没什么大问题。目前仪器坏了，借用了别处的仪器，型号和厂家也是相同的，响应值却很低

求问各位大佬血清中检测不出是什么原因，万分感谢！
推荐答案：歪果仁zZ回复于2021/07/17
看了你的PS，我认为故障不是出在样品前处理，应该是质谱仪器更换后出现的误差，建议先校准新仪器质量轴后再针对各个离子对分别优化，然后进样看一下响应有没有改善。
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歪果仁zZ
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2021/7/17 18:17:19 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
看了你的PS，我认为故障不是出在样品前处理，应该是质谱仪器更换后出现的误差，建议先校准新仪器质量轴后再针对各个离子对分别优化，然后进样看一下响应有没有改善。
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hujiangtao
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2021/7/18 10:14:41 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
血清基质复杂，可能影响目标物离子化了
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