主题：【第十四届原创】头孢呋辛赖氨酸中聚合物检查的色谱条件探索

β-内酰胺类抗生素中存在的各类高分子聚合杂质是引发速发过敏反应的过敏原，因此，有必要对头孢呋辛赖氨酸原料药中的聚合物进行控制。根据《中国药典》2020年版（四部）分子排阻色谱法测定。

色谱条件

色谱柱：葡聚糖凝胶色谱柱 （10 mm×300 mm，40～120 μm）；

流动相A：pH 7.0 的0.025 mol·L-1磷酸盐缓冲液[0.025 mol·L-1磷酸氢二钠-0.025 mol·L-1磷酸二氢钠溶液（61:39）]；

流动相B：水；

流速：1.2 mL·min-1 ；

检测波长：254 nm ；

柱温：35℃ 。

系统适用性试验

以流动相B为流动相测定，取0.5 mg·mL-1蓝色葡聚糖2000溶液100 μL注入液相色谱仪，记录色谱图。再精密量取对照溶液100 μL，连续进样6次，记录色谱图，计算峰面积值的相对标准偏差。

以流动相A为流动相测定，取0.5 mg·mL-1蓝色葡聚糖2000溶液100 μL注入液相色谱仪，记录色谱图。称取头孢呋辛赖氨酸约0.2 g，置10 mL量瓶，0.5 mg·mL-1蓝色葡聚糖2000溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，得头孢呋辛赖氨酸的蓝色葡聚糖2000溶液。取100 μL上述溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。再取供试品溶液100 μL注入液相色谱仪，记录色谱图。

蓝色葡聚糖2000溶液在A、B两种流动相条件下，理论塔板数按蓝色葡聚糖2000峰计算均不低于700，拖尾因子均小于2.0。在两种流动相系统中蓝色葡聚糖2000峰保留时间的比值为1.03，对照溶液主峰和供试品溶液中聚合物峰与相应色谱系统中蓝色葡聚糖2000峰的保留时间的比值分别为1.02，1.02。头孢呋辛赖氨酸蓝色葡聚糖2000溶液的色谱图中高聚体峰高和单体与高聚体之间的谷高的比值为8.5。对照溶液连续进样6次的峰面积值的RSD值为1.2%。试验结果见Fig.1～Fig.5。

Fig.1 The HPLC chromatogram of blue dextran 2000 with mobile phase B(1. blue dextran 2000)

Fig.2 The HPLC chromatogram of blue dextran 2000 with mobile phase A (1. blue dextran 2000)

Fig.3 The HPLC chromatogram of cefuroxime lysine dissolved in blue dextran 2000

with mobile phase A(1.cefuroxime polymer and blue dextran 2000)

Fig.4 The HPLC chromatogram of cefuroxime lysine sample with mobile phase A

(1.cefuroxime polymer)

Fig.5 The HPLC chromatogram of contrast solution with mobile phase B (1.cefuroxime)