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主题：【已应助】考马斯亮蓝法测定蛋白质含量加标回收率偏低

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发表于：2021/10/22 13:14:37 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
考马斯亮蓝法测定蛋白质含量加标回收率在80％左右，怎么做都升不上去，请大神指教有可能的原因，样品是β环糊精，蛋白质含量在0.2％左右
推荐答案：mingxiaoyan回复于2021/10/22
考马斯亮蓝法测定蛋白质含量时，准确度是由一定范围的，浓度超出范围肯定不准。高浓度和低浓度回收效率也是有一定范围的，最佳回收效率也是在适当浓度下。
注意事项

在试剂加入后的5-20 min内测定光吸收，因为在这段时间内颜色是最稳定的。

测定中，蛋白-染料复合物会有少部分吸附于比色杯壁上，测定完后可用乙醇将蓝色的比色杯洗干净。

利用考马斯亮蓝法分析蛋白必须要掌握好分光光度计的正确使用，重复测定吸光度时，比色杯一定要冲洗干净，制作蛋白标准曲线的时候，蛋白标准品最好是从低浓度到高浓度测定，防止误差。
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2021/10/22 14:49:56 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
考马斯亮蓝法测定蛋白质含量时，准确度是由一定范围的，浓度超出范围肯定不准。高浓度和低浓度回收效率也是有一定范围的，最佳回收效率也是在适当浓度下。
注意事项

在试剂加入后的5-20 min内测定光吸收，因为在这段时间内颜色是最稳定的。

测定中，蛋白-染料复合物会有少部分吸附于比色杯壁上，测定完后可用乙醇将蓝色的比色杯洗干净。

利用考马斯亮蓝法分析蛋白必须要掌握好分光光度计的正确使用，重复测定吸光度时，比色杯一定要冲洗干净，制作蛋白标准曲线的时候，蛋白标准品最好是从低浓度到高浓度测定，防止误差。
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2021/10/22 16:42:39 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 mingxiaoyan(mingxiaoyan) 发表:
考马斯亮蓝法测定蛋白质含量时，准确度是由一定范围的，浓度超出范围肯定不准。高浓度和低浓度回收效率也是有一定范围的，最佳回收效率也是在适当浓度下。
注意事项

在试剂加入后的5-20 min内测定光吸收，因为在这段时间内颜色是最稳定的。

测定中，蛋白-染料复合物会有少部分吸附于比色杯壁上，测定完后可用乙醇将蓝色的比色杯洗干净。

利用考马斯亮蓝法分析蛋白必须要掌握好分光光度计的正确使用，重复测定吸光度时，比色杯一定要冲洗干净，制作蛋白标准曲线的时候，蛋白标准品最好是从低浓度到高浓度测定，防止误差。
加标都是在曲线范围内的，每次测定后也都会用乙醇将比色皿用乙醇洗干净，但是回收率就是怎么做都不高
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