主题:【求助】SEC-MALLS测定多糖分子量求助

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Ins_61641e12
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本人最近在做多糖的SEC-MALLS测定分子量,用的流动相是0.1M氯化钠+0.02%的叠氮化钠,流速是0.5ml/min,上样浓度是1mg/mL,上样体积200ul,时间是40min,跑出来的如图所示,出现了LS信号和DRI信号偏移很大的情况。想请问一下是什么原因造成这种偏移的情况的呢?
另外,在拟合数据的时候选择峰的时候应该是以LS信号为选择标准,还是以DRI信号为标准呢?有很多不明白的地方,还请大佬指教!谢谢!
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小不董
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LS的信号和分子量大小直接成正比,一般LS检测器在RI检测器之前,会发现LS的信号出峰在RI(UV)之前,在大分子部分,LS的信号会比RI的信号强,lS信号不仅仅和浓度相关,还和分子大小更相关,而RI和物质dn/dc值成正比,和浓度正相关。
像楼主这样的样品是不适合计算绝对分子量的,但是能很好发现样品在不同分子量大小的一个整体情况。拟合计算相对分子量,不知道你是用的什么软件,一般都是UV或者RI的,但是你要用之前标准曲线用的保留时间是哪个对应计算的。用LS不大适合,保留时间会提前,计算出来会偏大。
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原文由 小不董(doxw0323) 发表:LS的信号和分子量大小直接成正比,一般LS检测器在RI检测器之前,会发现LS的信号出峰在RI(UV)之前,在大分子部分,LS的信号会比RI的信号强,lS信号不仅仅和浓度相关,还和分子大小更相关,而RI和物质dn/dc值成正比,和浓度正相关。像楼主这样的样品是不适合计算绝对分子量的,但是能很好发现样品在不同分子量大小的一个整体情况。拟合计算相对分子量,不知道你是用的什么软件,一般都是UV或者RI的,但是你要用之前标准曲线用的保留时间是哪个对应计算的。用LS不大适合,保留时间会提前,计算出来会偏大。
你好,我重新做了sec-malls-rid,更换了样品。结果如下图所示。我现在有一个疑惑的点在于第二张图中显示的斜率为负值,这样如何判断他的构象呢?
小不董
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看你的色谱图,在17min以后,紫外和示差信号有增强,可能是小分子杂质引起,积分计算选择主峰试一试看,浓度计算是用的紫外还是示差?
Ins_61641e12
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原文由 小不董(doxw0323) 发表:看你的色谱图,在17min以后,紫外和示差信号有增强,可能是小分子杂质引起,积分计算选择主峰试一试看,浓度计算是用的紫外还是示差?
峰选择的是第一个大峰,浓度选择的是示差
小不董
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看看你的样品能提纯下再测试不,可以考虑离心分离等方式,不小分子去除,留下目标物来测试,绝对分子量测试对样品要求更高,适合均聚物测试,不适合共聚物和混合物测试的,后面的小分子从示差信号反映出有较高浓度存在
Ins_61641e12
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