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主题：【分享】基于特征肽液质联用技术的人血白蛋白鉴定与定量分析

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zhangyongmei
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发表于：2024/11/04 16:13:37 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
目的筛选人血白蛋白种属特异性肽段,并基于该特征肽建立一种高效液相色谱-质谱联用技术(HPLC-MS)对人血白蛋白进行定性定量分析的方法。方法样品经胰蛋白酶酶解后,采用纳升液相色谱-高分辨质谱联用仪(nano HPLC-orbitrap fusion)分析,通过Proteome Discoverer质谱数据库搜索,筛选人血白蛋白的专属特征肽段;并采用液相-三重四极杆质谱联用多反应监测(multiple reaction monitor,MRM)模式,建立并验证专属性鉴别方法和定量分析方法,该方法以Waters ACQUITY UPLC BEH C18( 2.1 mmx50 mm,1.7 μm)为色谱柱,含0.1%甲酸水溶液为流动相 A,含 0.1%甲酸乙腈溶液为流动相B,进行梯度洗脱;流速为0.2mL·minˉ,定性与定量离子对为m/z507.5→189.2 和 m/z507.5→132.1。结果选择氨基酸序列为LVAASQAALGL的特征肽作为人血白蛋白的检测肽段,方法检测限为3.75 ng·mLˉ',定量限为2.5 ng·mLˉ,该肽段在12.5~100ng·mLˉ'浓度范围内,线性关系良好(r=0.996 4);精密度、重复性、稳定性试验的RSD 均<5%,回收率为92.3%~99.7%,RSD 为2.9%(n=6)。结论所选人血白蛋白特征肽段专属性强,可以准确识别人血白蛋白的种属来源;所建立的分析方法准确、可靠,可用于人血白蛋白定性鉴别及定量分析。
附件：
基于特征肽液质联用技术的人血白蛋白鉴定与定量分析_陈真.pdf
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