主题：【第七届原创】食品中草甘膦、草铵膦、氨甲基膦酸残留量检测方法

【生活中的仪器分析】

样    品：蔬菜、水果、茶叶、茶粉等食品

检测项目：草甘膦、草铵膦、氨甲基膦酸

参考标准：SN/T 1923-2007

检测仪器：

a.WATERS液相色谱串联质谱仪：配有电喷雾（ESI）离子源（可用其他品牌作用等效的高效液相色谱质谱仪替代）



b.Biotagevacmaster固相萃取仪

c.IPRE Qclean PMG草甘膦专用固相萃取柱

d.BiotageTurbovap LV 快速浓缩仪

e.IKA MS3 涡旋混匀器

g.TOMY-MX307离心机

g.昆山超声波清洗器

实验过程：



1.提取及预处理

称取2－5g（精确到0.001g）试样于50 mL聚丙烯离心管中，加入100μL内标液，加入20.0 mL水超声提取30min，于10000 r/min离心5min，取1.0 mL上清液于2mL子弹头离心管中，加入100μL酸度调节剂（注A），涡旋混匀，15000r/min离心5 min，待净化。

注A：酸度调节剂配制方法：纯水+色谱纯甲醇+盐酸=160＋40＋13.4（V/V/V）

2.固相萃取净化І

将PMG－І柱（蓝柱）用2mL甲醇和2 mL 0.5%甲酸淋洗活化并自然滴干，将加入酸度调节剂处理的提取液（2）转移到小柱上，用5mL刻度试管收集流出液（1-2滴/秒），用1.0mL 0.5%甲酸洗柱并真空抽干，合并流出液，用移液枪吸取50%NaOH调pH7-9（用1－14pH试纸，根据样品不同约20－50μL），加水定容到3 mL刻度，混匀，待衍生。

3.衍生步骤

准确吸取600 μL净化液（3）于2mL子弹头离心管中，加入200 μL 5%硼砂溶液，边涡旋，边加入200 μL 25g/L FMOC-Cl乙腈溶液（注B），放置10min，加入50 μL甲酸，涡旋混匀，15000 r/min离心5min，吸取上清液准备过PMG－ІІ柱。

注B：25 g/L FMOC-Cl乙腈溶液配制方法：称取0.25 gFMOC-Cl，溶解于10 mL色谱纯乙腈中。

4.固相萃取净化ІІ

    将PMG－ІІ柱（红柱）用2 mL甲醇和2 mL 0.5%甲酸淋洗并自然滴干，将上清液过PMG－ІІ柱，用3 mL水淋洗小柱，真空抽干5－10 min，再加入2 mL正己烷淋洗小柱，滴干后真空抽干5 min，最后用5 mL 5%氨水/甲醇洗脱小柱（1-2 mL/min）并用5 mL刻度试管收集流出液，45℃，氮气吹至近干，用20%乙腈定容1.0 mL，涡旋混匀，过0.2 μm PTFE膜后上机测试。



5.测定

5.1色谱条件

a.色谱柱：Waters BEH-C₁₈，1.7 μm，2.1 mm×100 mm；

b.流动相：5mmol/L乙酸铵:乙腈梯度洗脱，梯度表见表1；

                          表1 流动相及梯度

时间（min）	流速（mL/min）	5mmol/L乙酸铵（%）	乙腈（%）
0	0.3	90	10
2	0.3	62	38
4.4	0.3	62	38
4.5	0.3	5	95
6.5	0.3	5	95
6.6	0.3	90	10
9.0	0.3	90	10

c.检测器：串联四极杆质谱仪；

d.柱温：35℃；

e.进样量：10 μL。

5.2质谱分析条件

a）电离源：电喷雾正离子模式；

b）毛细管电压：3.50KV；

c）源温度：120℃；

d）脱溶剂气温度：400℃；

e）脱溶剂气流量：700L/h；

f）碰撞室压力：2.7í10^-3mbar；

g）特征离子及参数见表2。

                表 2 草甘膦和氨甲基膦酸的主要特征离子

化合物	保留时间（min）	母离子[M+H]+（m/z）	锥孔电压（V）	子离子（m/z）	碰撞能量（eV）
草甘膦	1.32	392.2	15	*88.0	25
			15	214.0	10
氨甲基膦酸	2.14	334.2	15	*179.0	25
			15	112.0	18
草铵膦	1.66	404.0	15	*136.0	20
			15	208.0	10
1，2-C13N15草甘膦内标	1.32	395.2	15	91.0	25

*定量离子

6.结果计算：

按下式分别计算供试样品中的草甘膦、氨甲基膦酸、草铵膦残留量。

                            W=( c_i x 20 x 3 ) / ( m x 1000 )                       

w－供试样品中草甘膦、氨甲基膦酸、草铵膦残留量，mg/kg；

c_i－试样处理溶液中草甘膦、氨甲基膦酸、草铵膦的浓度，μg/L；

m－供试样品重量，g。

检测限

本方法草甘膦、氨甲基膦酸、草铵膦检测限为0.01 mg/kg。

回收率

本方法草甘膦、氨甲基膦酸、草铵膦回收率为：90%～120%。

谱图如下：



图1 茶叶加标样品谱图（40μg/L）

1、草甘磷（1.32min），2、草铵膦（1.66min），3、氨甲基膦酸（2.14min）

another：

茶粉中草甘膦、氨甲基膦酸、草铵膦的检测实例

注：茶粉特性：浓度高（由茶水浓缩而成，一般用于制作茶饮料等）

检测过程：

1.称2g样品，加20mL水溶解后处理检测，前处理和色谱条件如上。

2.实验结果：

	草甘膦，mg/kg	氨甲基膦酸，mg/kg	草铵膦，mg/kg
绿茶粉（阴性）	0.21	未检出	未检出
绿茶粉（阳性）	0.58	未检出	未检出
红茶粉	0.48	未检出	未检出
乌龙茶粉	0.38	未检出	未检出

绿茶粉（阴性）加标回收：

加标浓度，ng/ml	实测值，ng/ml	回收率，%	检测限，mg/kg
草甘膦	40.8	42.6	104	0.003
氨甲基膦酸	47.0	50.4	107	0.003
草铵膦	45.8	53.2	116	0.003

谱图如下：



  图1：标准品谱图

3.03min：草甘膦40.8ng/mL；  3.28min：氨甲基膦酸47.0ng/mL；  3.69min：草胺磷45.8 ng/mL





图2 绿茶粉（阴性）

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图3 绿茶粉（阴性）加标




图4 绿茶粉（阳性）




图5 红茶粉




图6 乌龙茶粉




图7 绿茶粉（阴性）（6.4ng/ml）草甘膦信噪比